本文關(guān)鍵詞：EcN莢膜多糖合成基因kfiA的功能研究

  更多相關(guān)文章： 莢膜多糖 肝素前體 Nissle 1917

【摘要】：大腸桿菌Nissle 1917(EcN)是一種腸道益生菌,血清型為O6:K5:H1。在腸道中,EcN可以通過胞外的莢膜多糖抑制病原菌的定殖。此外,EcN莢膜多糖的主要成分是抗凝血藥物肝素的前體物質(zhì),因此研究EcN莢膜多糖的合成途徑具有重要的意義。本課題主要利用分子生物學(xué)技術(shù),研究EcN菌株的莢膜多糖合成基因kfi A的功能,分析莢膜多糖的生物合成機(jī)理。提取、純化EcN莢膜多糖,并通過1H核磁共振檢測(cè)。確定了莢膜多糖的特征峰的化學(xué)位移約為2ppm。其次,通過λ-red重組系統(tǒng)成功構(gòu)建kfiA突變株,對(duì)突變株的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)kfi A基因的缺失并未明顯影響菌體的生長(zhǎng)。利用1H核磁共振檢測(cè)EcN和EcNΔkfi A的莢膜多糖,發(fā)現(xiàn)kfiA缺失株不能合成莢膜多糖。為了對(duì)該結(jié)論進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證,我們又對(duì)kfiA突變株進(jìn)行基因回補(bǔ)。再次利用核磁共振檢測(cè)EcN、EcNΔkfiA、EcNΔkfiA IntΦ80::pAH162-KpsMP-kfi A以及EcNΔkfiA IntΦ80::pAH162的莢膜多糖,發(fā)現(xiàn)只有kfiA基因存在時(shí),EcN菌株才能合成莢膜多糖。
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q936

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 林樹乾;楊少華;張維軍;王洪梅;高運(yùn)東;李國(guó)升;李慶劇;趙宏坤;仲躋峰;;金黃色葡萄球菌莢膜多糖的制備及生物學(xué)特性[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2006年06期

2 孫煥;楊宏軍;胡桂學(xué);何洪彬;楊少華;王長(zhǎng)法;王洪梅;高運(yùn)東;仲躋峰;;金黃色葡萄球菌莢膜多糖的提取及其多糖含量的測(cè)定[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2009年06期

3 劉慶濤;王杰;馬晶晶;張乃生;;金黃色葡萄球菌莢膜多糖血清1型和2型的研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年02期

4 肖國(guó)生;曹三杰;段麗麗;文心田;肖馳;馬曉平;楊利;;胸膜肺炎放線桿菌莢膜多糖輸出基因部分序列的克隆鑒定、序列拼接和分析應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2007年03期

5 阮國(guó)瑞;范子文;張雪萍;;艱難梭菌莢膜多糖的提純和分析[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;1993年04期

6 于珊珊;劉東波;王偉華;李雁;王秀然;黃國(guó)輝;;生孢噬纖維菌莢膜多糖的分離純化及其性質(zhì)[J];應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào);2006年06期

7 王英杰;楊宏軍;王長(zhǎng)法;安利國(guó);;金葡菌莢膜多糖血清型的研究進(jìn)展[J];生物學(xué)雜志;2007年06期

8 郭豫宜;孫映令;劉明;;莢膜多糖菌苗的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).生物制品分冊(cè);1984年02期

9 張紫恒;趙峽;于廣利;王楷;;細(xì)菌莢膜多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)[J];生命的化學(xué);2011年05期

10 孫銀燕,胡緒敬;腦膜炎奈瑟菌A群莢膜多糖與B群外膜蛋白復(fù)合物偶聯(lián)物的制備和免疫原性[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2000年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 肖國(guó)生;曹三杰;段麗麗;文心田;肖馳;馬曉平;楊利;;胸膜肺炎放線桿菌莢膜多糖輸出基因部分序列的克隆鑒定、序列拼接和分析應(yīng)用[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

2 肖國(guó)生;曹三杰;段麗麗;文心田;肖馳;馬曉平;楊利;;胸膜肺炎放線桿菌莢膜多糖輸出基因部分序列的克隆鑒定、序列拼接和分析應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

3 劉方蕾;吳兵;王晶;袁菲;趙志強(qiáng);楊明;謝貴林;;A群奈瑟氏腦膜炎球菌莢膜多糖-破傷風(fēng)類毒素結(jié)合物的制備及其工藝穩(wěn)定性研究[A];2011中國(guó)生物制品年會(huì)暨第十一次全國(guó)生物制品學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 安翠英;EcN莢膜多糖合成基因kfiA的功能研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2017年

2 劉慶濤;金黃色葡萄球菌血清5型莢膜多糖的提取純化及鑒定[D];吉林大學(xué);2007年

3 張紫恒;不同血清分型鏈球菌莢膜多糖的提取分離與結(jié)構(gòu)組成初步分析[D];中國(guó)海洋大學(xué);2011年

4 陳志華;Zunongwangia profunda SM-A87莢膜多糖顯微結(jié)構(gòu)及抗菌肽對(duì)枯草芽孢桿菌抑菌機(jī)理的原子力顯微鏡研究[D];山東大學(xué);2013年

5 黃承洪;Riemerella anatipestifer的分離鑒定及莢膜多糖研究[D];西南大學(xué);2006年

6 潘志忠;金黃色葡萄球菌莢膜多糖完全抗原的制備、鑒定及免疫學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2007年

7 嚴(yán)勝平;CP5型金黃色葡萄球菌莢膜多糖的提取純化與鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

8 楊琦;金葡萄5型莢膜多糖單克隆抗體制備及ELISA方法建立[D];吉林大學(xué);2009年

9 路迎迎;副雞禽桿菌莢膜多糖提取分析及免疫原性研究[D];河北工程大學(xué);2014年

10 王姝懿;金黃色葡萄球菌血清8型莢膜多糖的提取純化及其偶聯(lián)物免疫學(xué)特性的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：1264719