本文關(guān)鍵詞：眼點(diǎn)微擬球藻二十碳五烯酸高效積累及其提取純化研究

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【摘要】：眼點(diǎn)微擬球藻(Nannochloropsis oculata)富含二十碳五烯酸(EPA,eicosapentaenoic acid),其中EPA具有較高的保健和藥用價(jià)值。本研究分別從微擬球藻培養(yǎng)策略研究、EPA提取方法選取及純化方法優(yōu)化出發(fā),以期提高微擬球藻EPA純度及產(chǎn)量。通過(guò)光強(qiáng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),微擬球藻比生長(zhǎng)速率隨光強(qiáng)增加而增加,當(dāng)光強(qiáng)從1000 lux增加到9000 lux,比生長(zhǎng)速率從0.25 d~(-1)增加至0.54 d~(-1),增加了116%。提高光強(qiáng)會(huì)降低葉綠素a含量,增加油脂和總糖含量,而對(duì)胞內(nèi)蛋白含量的影響較小。隨著光強(qiáng)增加,EPA相對(duì)含量從25.5%降至13.1%,EPA產(chǎn)量由5.1 mg·L~(-1)降至2.7 mg·L~(-1)。通過(guò)氮源種類實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),采用乙酸銨作為氮源對(duì)微擬球藻生長(zhǎng)最佳,其生物量可達(dá)0.41 g·L~(-1),比硝酸鈉、氯化銨、尿素和硝酸銨組分別高出17.1%、5.1%、7.9%和10.8%。硝酸鈉組的葉綠素a含量高于其他組,乙酸銨組的油脂和蛋白含量均高于其他組,氮源種類對(duì)胞內(nèi)總糖含量的影響較小。硝酸鈉組EPA相對(duì)含量最高為27.1%,乙酸銨組EPA產(chǎn)量最高為15.6 mg·L~(-1)。通過(guò)兩階段氮源補(bǔ)料實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)過(guò)程補(bǔ)加乙酸銨,可同時(shí)提高微擬球藻EPA相對(duì)含量及產(chǎn)量,通過(guò)優(yōu)化乙酸銨補(bǔ)料時(shí)間,確定最佳補(bǔ)料時(shí)間為第11天,EPA相對(duì)含量及產(chǎn)量分別為24.3%和26.8 mg·L~(-1),較對(duì)照組分別提高了7.5%和22.4%。通過(guò)比較3種提取方法對(duì)微擬球藻EPA提取率和脂肪酸組成影響發(fā)現(xiàn),采用直接皂化法對(duì)未研磨的微擬球藻粉進(jìn)行EPA提取效果最佳,EPA提取率達(dá)到39.4%,比皂化法提取研磨微擬球藻粉、B-D法提取研磨和未研磨藻粉、超臨界萃取法提取研磨和未研磨藻粉分別提高了10.4%、6.8%、82.4%、275.2%和579.3%。利用單因素影響實(shí)驗(yàn)確定了三個(gè)要素的響應(yīng)面中間點(diǎn):尿素/脂肪酸3,95%乙醇/尿素5,包合溫度0oC。利用Design-expert 8.0.6進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),生成17組實(shí)驗(yàn)。通過(guò)模型預(yù)測(cè)分析,得到的最佳包合條件為:尿素/脂肪酸2.3,95%乙醇/尿素4.7,溫度1.1oC,EPA純度及得率的預(yù)測(cè)值分別為57.0%和79.8%。在最佳包合條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),EPA純度及得率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為55.6%和80.4%,與預(yù)測(cè)值較為吻合,說(shuō)明模型較好反映了尿素包合法純化EPA的條件。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q946

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本文編號(hào)：1260023