本文關(guān)鍵詞：HIF-1α和HIF-2α基因在靈長類中的分子進(jìn)化研究

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【摘要】：靈長目(Order Primates)是脊索動物門(Phylum Chordata)哺乳綱(Mammalia)的一個目。非人靈長類在形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理機(jī)能和生化代謝方面與人相似,一直以來都是研究的熱點(diǎn),氧穩(wěn)態(tài)的維持是生物體細(xì)胞生命活動的基本前提,主要的維持氧平衡的調(diào)節(jié)因子是缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factors, HIFs), HIFs是由調(diào)節(jié)亞基a和結(jié)構(gòu)亞基β組成的二聚體,]HIF-α亞基有3種異構(gòu)體,分別是HIF-1α, HIF-2α和HIF-3α,其中HIF-1a、HIF-2α是細(xì)胞在缺氧應(yīng)答反應(yīng)中最重要的調(diào)節(jié)因子,通過對靈長類動物HIF-1α和HIF-2α的分子進(jìn)化研究,將有助于理解靈長類動物應(yīng)對這一自然選擇時(shí),表現(xiàn)出的適應(yīng)與進(jìn)化。本研究通過PCR擴(kuò)增技術(shù)及測序技術(shù),獲得4個靈長類動物HIF-1α和HIF-2α的完整編碼區(qū)序列,它們分別是川金絲猴(Pygathrix roxellanae)、豚尾猴(Macaca nemestrina)、藏酋猴(Macaca thibetana)、和白臀葉猴(Pygathrix nemaeus),從公共數(shù)據(jù)庫中下載得到10個其他靈長類動物的HIF-1α和HIF-2α基因完整編碼區(qū)序列。在基于這些物種HIF-1α和HIF-2α基因編碼區(qū)序列的基礎(chǔ)上,利用MEGA6.0及Lasergene軟件包對序列進(jìn)行整理分析核苷酸和氨基酸序列特征,利用Bioedit軟件內(nèi)置程序?qū)π蛄械南嗨贫冗M(jìn)行計(jì)算,NCBI在線預(yù)測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域,分別使用鄰接(NJ)法和最大似然(ML)法對兩個基因進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹的重建,利用分子進(jìn)化的相關(guān)理論知識,對靈長類動物中HIF-1α和HIF-2α基因的進(jìn)化情況進(jìn)行初步探討,并得到如下一些主要結(jié)果：1)本研究成功擴(kuò)增出川金絲猴、豚尾猴、藏酋猴、白臀葉猴的HIF-1α和HIF-2α基因完整編碼區(qū)序列；HIF-1α基因序列在這四個物種中的長度為2481 bp, HIF-2α基因的長度在白臀葉猴屬的兩個物種白臀葉猴和藏酋猴中為2610 bp,在獼猴屬的川金絲猴和豚尾猴中為2595bp。2)利用測得的序列和數(shù)據(jù)庫中已經(jīng)報(bào)道的序列對靈長類動物的同源性進(jìn)行比較,同源性結(jié)果顯示,相似度均較高,HIF-1α基因核苷酸的同源性在93%以上,氨基酸同源性在95%以上；HIF-2α基因核苷酸的同源性在87%以上,氨基酸同源性在88%以上；除此之外,原猴亞目表現(xiàn)出與人猿亞科較高的相似度。3)通過NCBI在線CDD軟件預(yù)測HIF-1α和HIF-2α蛋白的保守結(jié)構(gòu)域,結(jié)果顯示,HIF-1α與HIF-2α蛋白均具有非常明顯的bHLH-PAS結(jié)構(gòu)、ODD區(qū)和C-TAD區(qū),且這兩個基因的結(jié)構(gòu)相似。4)通過鄰接法和最大似然法對所獲得的HIF-1α與HIF-2α基因構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果顯示NJ樹和ML樹具有相同的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。分為人、大猿、小猿、舊大陸猴、新大陸猴和原猴6個大的聚類,各類靈長類動物的物種很好的聚為單群,且分枝間的分歧通過置信值得到了很好的支持。5)通過PAML平臺和對靈長類的進(jìn)化速率進(jìn)行估算,選擇壓力顯示HIF-1α和HIF-2α在各物種間受到了強(qiáng)烈的純凈化選擇,表明他們的功能對生物的生命維系具有重要的作用。按照原猴、新大陸猴、舊大陸猴、小猿、大猿和人分類,HIF-1α在各類群中的進(jìn)化速率并沒有表現(xiàn)出明顯的差異,HIF-2α則有顯著的差異,且在原猴亞目檢測多個正選擇位點(diǎn)。本研究從分子進(jìn)化的角度出發(fā),探討HIF-1α和HIF-2α基因在靈長類中的系統(tǒng)發(fā)育及選擇壓力,為靈長類轉(zhuǎn)錄因子基因的進(jìn)化研究提供基礎(chǔ),為更好的了解HIF-1α和HIF-2α基因在各種疾病中的影響具有一定的幫助作用。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q953

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本文編號：1139026