發(fā)布時(shí)間：2017-06-03 13:13

  本文關(guān)鍵詞：鉛和鄰苯二甲酸二丁酯聯(lián)合暴露對(duì)小鼠和斑馬魚(yú)胚胎的毒性及初步機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展,環(huán)境問(wèn)題日益突出。鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)常被作為增塑劑和添加劑應(yīng)用于塑料、農(nóng)藥和化妝品等產(chǎn)品的生產(chǎn)中;鉛(Pb)是一種廣泛應(yīng)用且普遍存在于環(huán)境中的重金屬污染物。Pb和DBP在大氣、水體、土壤和食物中均有一定程度的檢出,兩者可同時(shí)暴露于人體,對(duì)人類健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。目前針對(duì)兩者的研究多為單一暴露的毒性研究,而關(guān)于兩者聯(lián)合暴露毒性和作用機(jī)制的研究鮮見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。因此,本文選取初斷乳小鼠和斑馬魚(yú)胚胎為研究對(duì)象,通過(guò)研究小鼠及斑馬魚(yú)胚胎相關(guān)指標(biāo)的變化情況,初步探討Pb和DBP的聯(lián)合暴露的毒性及其作用機(jī)制,為聯(lián)合暴露的研究提供基礎(chǔ),該研究對(duì)人類健康具有重要意義。主要研究結(jié)果如下:第一部分Pb和DBP聯(lián)合暴露對(duì)初斷乳小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及其初步機(jī)制Pb(50 mg/L)和DBP(10和250 mg/kg b.w.)單獨(dú)及聯(lián)合對(duì)3周齡小鼠暴露8周,其中DBP采用灌胃暴露,Pb通過(guò)飲水暴露。采用行為學(xué)、酶學(xué)和蛋白印跡等方法,分析Pb和DBP聯(lián)合暴露對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響,初步探討其作用機(jī)制。1、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),與空白對(duì)照組相比,各暴露組小鼠的逃逸潛伏期顯著增加,平均穿越平臺(tái)的次數(shù)顯著減少(p0.05),說(shuō)明Pb和DBP單獨(dú)及聯(lián)合暴露均對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力有一定的損傷作用。2、小鼠組織中Pb含量測(cè)定結(jié)果表明,Pb在小鼠各組織中均有一定程度的積累,且在腦組織中尤為明顯。說(shuō)明腦是Pb作用的靶器官,Pb可在腦組織中大量蓄積,影響小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。3、酶學(xué)和蛋白印跡分析表明:(1)Pb和DBP聯(lián)合暴露誘導(dǎo)了小鼠腦組織中NOS的過(guò)量表達(dá),使得NO含量顯著增加;同時(shí)SOD的活力下降,MDA水平上升;誘導(dǎo)大腦組織脂質(zhì)過(guò)氧化的發(fā)生,造成大腦細(xì)胞損傷。(2)Pb和DBP聯(lián)合暴露致小鼠腦組織中ACh E活性顯著增高,使得膽堿能神經(jīng)元活化,破壞了ACh的正常的代謝平衡,造成小鼠神經(jīng)損傷。(3)Pb和DBP聯(lián)合暴露可通過(guò)上調(diào)小鼠海馬中Caspase-3蛋白的表達(dá)和Bax/Bcl-2的比值,誘導(dǎo)小鼠海馬細(xì)胞發(fā)生凋亡。第二部分Pb和DBP聯(lián)合暴露對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的毒性及其初步作用機(jī)制以Pb(0.01和1 mg/L)和DBP(0.005和0.5 mg/L)單獨(dú)及聯(lián)合對(duì)斑馬魚(yú)胚胎暴露120h。采用熒光定量PCR測(cè)定斑馬魚(yú)胚胎神經(jīng)、細(xì)胞凋亡、發(fā)育、免疫和抗氧化相關(guān)基因表達(dá)變化情況,研究Pb和DBP暴露對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的毒性作用,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。1、Pb和DBP聯(lián)合暴露可以誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎中NRIA、NR2A、NRAD和c-fos基因表達(dá)水平上升,bcl-2基因表達(dá)水平下降,說(shuō)明兩者聯(lián)合暴露可通過(guò)影響斑馬魚(yú)胚胎神經(jīng)和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá),影響斑馬魚(yú)神經(jīng)發(fā)育并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,對(duì)斑馬魚(yú)胚胎產(chǎn)生毒性。兩者聯(lián)合暴露無(wú)交互作用2、Pb和DBP聯(lián)合暴露可以誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎中hsp70基因表達(dá)水平下降,cyp1a基因表達(dá)水平上升;說(shuō)明Pb和DBP聯(lián)合暴露可通過(guò)影響斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá),對(duì)斑馬魚(yú)胚胎產(chǎn)生發(fā)育毒性。兩者聯(lián)合暴露無(wú)交互作用。3、Pb和DBP聯(lián)合暴露可以誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎中IL-1β和C3B基因表達(dá)水平上升,Lyz基因表達(dá)水平下降。說(shuō)明Pb和DBP聯(lián)合暴露可通過(guò)影響斑馬魚(yú)胚胎免疫相關(guān)基因的表達(dá),對(duì)斑馬魚(yú)胚胎產(chǎn)生免疫毒性。兩者聯(lián)合暴露無(wú)交互作用。4、Pb和DBP暴露可以誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和GPx基因表達(dá)水平上升的;說(shuō)明Pb和DBP聯(lián)合暴露影響抗氧化相關(guān)基因的表達(dá),破壞斑馬魚(yú)胚胎抗氧化系統(tǒng)平衡。兩者聯(lián)合暴露無(wú)交互作用。
【關(guān)鍵詞】：鉛 鄰苯二甲酸二丁酯 聯(lián)合暴露 斑馬魚(yú)胚胎 小鼠
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：X171.5;X503.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一部分 緒論11-22
• 1.1 鄰苯二甲酸二丁酯的污染現(xiàn)狀、毒性及其作用機(jī)制11-15
• 1.1.1 環(huán)境中的鄰苯二甲酸二丁酯的污染狀況11-13
• 1.1.2 鄰苯二甲酸二丁酯的毒性及其作用機(jī)制13-15
• 1.2 鉛的的污染現(xiàn)狀、毒性及其作用機(jī)制15-20
• 1.2.1 環(huán)境中鉛的污染現(xiàn)狀15-16
• 1.2.2 鉛的毒性及其作用機(jī)制16-20
• 1.3 本文研究背景和意義20
• 1.4 本論文研究的主要內(nèi)容和技術(shù)路線20-22
• 1.4.1 主要內(nèi)容20-21
• 1.4.2 技術(shù)路線21-22
• 第二部分 鉛和DBP聯(lián)合暴露對(duì)初斷乳小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及其初步作用機(jī)制22-45
• 2.1 試劑與儀器22-23
• 2.1.1 主要試劑22-23
• 2.1.2 主要儀器23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-29
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)23-24
• 2.2.3 一般情況觀察24
• 2.2.4 Morris水迷宮試驗(yàn)24-25
• 2.2.5 血常規(guī)與血生化分析25-26
• 2.2.6 臟器指數(shù)測(cè)定26
• 2.2.7 小鼠組織中Pb含量的測(cè)定26
• 2.2.8 小鼠組織中酶活力的測(cè)定26-28
• 2.2.9 Western-blotting法檢測(cè)小鼠海馬組織中bax, bcl-2 和Caspase-3 蛋白表達(dá)28-29
• 2.2.10 數(shù)據(jù)分析29
• 2.3 結(jié)果與討論29-43
• 2.3.1 對(duì)小鼠一般情況的影響29
• 2.3.2 對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)率和臟器指數(shù)的影響29-30
• 2.3.3 對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響30-32
• 2.3.4 對(duì)小鼠血常規(guī)與血生化指標(biāo)的影響32-35
• 2.3.5 對(duì)小鼠組織中Pb含量的影響35
• 2.3.6 對(duì)小鼠腦組織中TNOS和iNOS活性的影響35-37
• 2.3.7 對(duì)小鼠組織中SOD活性和MDA水平的影響37-38
• 2.3.8 對(duì)小鼠腦組織中AChE活性的影響38-39
• 2.3.9 對(duì)小鼠腦組織中神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響39-42
• 2.3.10 主成分分析42-43
• 2.4 本章小結(jié)43-45
• 第三部分 鉛和DBP聯(lián)合暴露對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的毒性及其初步作用機(jī)制45-68
• 3.1 試劑與儀器45-46
• 3.1.1 主要試劑45-46
• 3.1.2 主要儀器46
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法46-51
• 3.2.1 斑馬魚(yú)飼養(yǎng)46-47
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)47
• 3.2.3 一般情況觀察47
• 3.2.4 RT-PCR法測(cè)定47-50
• 3.2.5 數(shù)據(jù)分析50-51
• 3.3 結(jié)果與討論51-66
• 3.3.1 對(duì)斑馬魚(yú)胚胎孵化率和死亡率的影響51
• 3.3.2 對(duì)斑馬魚(yú)胚胎神經(jīng)相關(guān)基因表達(dá)的影響51-54
• 3.3.3 對(duì)斑馬魚(yú)胚胎細(xì)胞凋亡基因表達(dá)的影響54-56
• 3.3.4 對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的影響56-58
• 3.3.5 對(duì)斑馬魚(yú)胚胎免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響58-61
• 3.3.6 對(duì)斑馬魚(yú)胚胎抗氧化相關(guān)基因表達(dá)的影響61-64
• 3.3.7 主成分分析64-66
• 3.4 本章小結(jié)66-68
• 第四部分 結(jié)論與展望68-70
• 4.1 主要結(jié)論68-69
• 4.2 展望69-70
• 參考文獻(xiàn)70-81
• 致謝81-82
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文82

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