作為動物羽毛、蹄角、皮毛主要成分的角蛋白,在自然界中普遍存在。由于它具有十分穩(wěn)定的結(jié)構(gòu),很難被一般的蛋白酶降解,并且其粗蛋白含量很高,如果直接丟棄會造成蛋白質(zhì)資源的巨大浪費(fèi)。微生物分泌的角蛋白酶可以高效地降解角蛋白,這對緩解我國蛋白質(zhì)資源短缺的現(xiàn)狀具有重要意義,同時也有利于環(huán)境保護(hù)。 本文以角蛋白降解菌GZD-23為研究對象,對其發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化,并且對其所產(chǎn)的角蛋白酶基因進(jìn)行了克隆、表達(dá)和重組酶的理化特性研究。 采用響應(yīng)面法優(yōu)化了角蛋白降解菌GZD-23的發(fā)酵條件。通過Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)篩選出對GZD-23產(chǎn)角蛋白酶有顯著影響的三個因素：蔗糖、蛋白胨和pH值。再利用最陡爬坡實(shí)驗(yàn)和Box-Behnken實(shí)驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化,最終確定角蛋白降解菌GZD-23產(chǎn)角蛋白酶的最佳發(fā)酵條件為：蔗糖1.6%,蛋白胨0.79%,pH9.17,羽毛含量20g/L,搖床轉(zhuǎn)速100rpm/min,發(fā)酵溫度30℃,接種量7%,裝液量150mL。按上述條件進(jìn)行發(fā)酵,測得角蛋白酶的酶活為4.91U/mL,較發(fā)酵條件未優(yōu)化的菌株提高了104.58%,與預(yù)測值4.96U/mL基本相符。 對角蛋白降解...

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-2角蛋白多肽鏈的二級結(jié)構(gòu)

角蛋白降解窗的發(fā)酵條件優(yōu)"ft及相關(guān)基因的研究的具體情況見圖1-2。0??.?Z %負(fù)：爲(wèi)。^^調(diào)III i?—/iS^i"、0貧御供,c^ II 1^^‘hv<kog?nbond hyi^ro^enbond<X-螺旋結(jié)構(gòu) p—折疊結(jié)構(gòu)圖1-2角蛋白多....

圖3-1GZD-23基因組DNA電泳圖

圖3-1GZD-23基因組DNA電泳圖Fig.3-1ElectrophoretogramofgenomicDNAofGZD-23M：1KbPlusDNAMarker；1：GZD-23基因組DNA條帶角蛋白酶基因全長的克隆以GZD-23基因組DNA為....

圖3-2角蛋白酶基因PCR圖

以GZD-23基因組DNA為模板，GZD-F/GZD-R為引物擴(kuò)增角蛋白酶基因，得到目的基因的大小為1100bp左右，與預(yù)計(jì)的1146bp相符。結(jié)果見圖3-2。44

圖3一3質(zhì)粒DN人電泳圖

unuii圖3-3質(zhì)粒DNA電泳圖 m3-4雙酶切電泳圖-Fig,3-3Electrophoretogramofplasmid Fig.3-4ElectrophoretogramofdoubleDNA digestD：空載體對照；1?3:質(zhì)粒DNA條帶 M:I....

本文編號：3983540