近年來(lái),土壤重金屬污染日益嚴(yán)重,特別是鉛污染,土壤污染的鉛離子通過(guò)生物鏈最終富集到人類的組織和器官中,對(duì)人類的健康夠成了極大的威脅。如何根除或降低土壤鉛污染已成為當(dāng)前環(huán)境與食品科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一。目前解決該問(wèn)題的技術(shù)途徑主要有:(1)通過(guò)植物修復(fù)等技術(shù)(包括植物修復(fù)基因工程)清除土壤鉛污染;(2)通過(guò)農(nóng)藝措施或轉(zhuǎn)基因技術(shù)減少農(nóng)作物可食部位的鉛積累。然而,這項(xiàng)工作的關(guān)鍵點(diǎn)在于對(duì)植物耐受鉛毒害及其富集的分子機(jī)理的認(rèn)識(shí)以及關(guān)鍵基因的發(fā)掘。前期研究發(fā)現(xiàn)PDR12作為細(xì)胞質(zhì)膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,能夠?qū)⒅参锛?xì)胞中的重金屬通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞外來(lái)減少植物中重金屬的含量,從而提高了植物對(duì)重金屬的耐受性。b ZIP類轉(zhuǎn)錄因子家族中b ZIP19、b ZIP23和b ZIP24轉(zhuǎn)錄因子參與植物對(duì)鉛的脅迫響應(yīng),且在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)PDR12基因的表達(dá)有顯著的正調(diào)控作用。為了從遺傳學(xué)角度證實(shí)PDR12基因是轉(zhuǎn)錄因子b ZIP19、b ZIP23、b ZIP24的潛在靶基因,本研究構(gòu)建了bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2/35S:PDR12材料并進(jìn)行了分析,獲得了以下主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1、每個(gè)轉(zhuǎn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 模式植物擬南芥簡(jiǎn)介
    1.2 重金屬脅迫對(duì)植物的危害
    1.3 植物對(duì)重金屬脅迫的抗性機(jī)制
    1.4 PDR12/ABCG40基因?qū)︺U脅迫響應(yīng)的研究進(jìn)展
        1.4.1 ABC G型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.4.2 PDR12/ABCG40轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能研究
    1.5 BZIP家族的研究進(jìn)展
        1.5.1 植物bZIP類轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.5.2 植物bZIP類轉(zhuǎn)錄因子的功能研究
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與質(zhì)粒
    2.2 主要試劑
        2.2.1 常用分子生物學(xué)試劑盒
        2.2.2 常用酶類
        2.2.3 常用生化試劑
        2.2.4 常用溶液與試劑的配制
    2.3 主要儀器與設(shè)備
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 滅菌與消毒
        2.4.2 擬南芥的種植與培養(yǎng)
        2.4.3 根長(zhǎng)和鮮重的測(cè)量
        2.4.4 1.5×CTAB法提取植物全基因組DNA
        2.4.5 Trizol法提取植物組織總RNA
        2.4.6 全基因組cDNA合成
        2.4.7 qRT-PCR
        2.4.8 引物設(shè)計(jì)
        2.4.9 PCR反應(yīng)體系及程序
        2.4.10 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)核酸
        2.4.11 PCR產(chǎn)物純化
        2.4.12 瓊脂糖凝膠電泳產(chǎn)物回收
        2.4.13 高純度質(zhì)粒DNA的提取
        2.4.14 酶切反應(yīng)
        2.4.15 T₄連接反應(yīng)
        2.4.16 大腸桿菌DH5α 菌株相關(guān)實(shí)驗(yàn)
        2.4.17 T載體PCR產(chǎn)物克隆
        2.4.18 農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化
        2.4.19 植物過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.20 花序侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥
        2.4.21 擬南芥的雜交
        2.4.22 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 擬南芥單突變體的分離與鑒定
        3.1.1 擬南芥單突變純合體的分離與鑒定
        3.1.2 擬南芥單突變純合體的表型鑒定
    3.2 擬南芥bzip19-2/bzip23-1 雙突變體的分離與鑒定
        3.2.1 擬南芥bzip19-2/bzip23-1 雙突變雜合體的獲得與鑒定
        3.2.2 擬南芥bzip19-2/bzip23-1 雙突變純合體的分離與鑒定
    3.3 擬南芥bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2 三突變體的分離與鑒定
        3.3.1 擬南芥bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2 三突變雜合體的獲得與鑒定
        3.3.2 擬南芥bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2 三突變純合體的分離與鑒定
        3.3.3 擬南芥bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2 三突變純合體在鉛脅迫下的表型分析
        3.3.4 擬南芥突變體中PDR12基因的表達(dá)量分析
    3.4 擬南芥 35S: PDR12材料的構(gòu)建
        3.4.1 擬南芥中PDR12基因過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.4.2 擬南芥 35S:PDR12植株的獲得
    3.5 擬南芥的bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2/35S:PDR12材料構(gòu)建
        3.5.1 擬南芥的bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2/35S:PDR12雜合植株的獲得與鑒定
        3.5.2 擬南芥bzip19-2/bzip23-1/bzip24-2/35S:PDR12純合植株的分離與鑒定
第四章 討論與展望
    4.1 結(jié)果與討論
    4.2 后期工作展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動(dòng)及成果情況



本文編號(hào)：3936155