六氯苯(Hexachlorobenzene,C6Cl6,簡(jiǎn)稱HCB)的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,很難降解,對(duì)生態(tài)環(huán)境具毒性效應(yīng),被《關(guān)于持久性有機(jī)污染物的斯德哥爾摩公約》列為12種持久性有機(jī)污染物(persistent organic pollutants,POPs)之一。由于目前尚未分離到可以礦化六氯苯的純培養(yǎng)物,因此得到可徹底降解六氯苯的工程菌,解決六氯苯的難降解問(wèn)題,具有重要的理論和實(shí)際意義。 本研究首先探討了共培養(yǎng)E. coli DH5α[pCWSGB-camC]與ATCC39723降解六氯苯的可能性。 接著利用同源重組方法將表達(dá)單元cam A+B+C定點(diǎn)重組在五氯酚降解菌ATCC39723非必需基因pcpM上,把五氯酚降解菌改造成六氯苯降解菌。利用氣相色譜(GC-ECD)對(duì)重組工程菌ZWY005進(jìn)行功能測(cè)定,在重組工程菌細(xì)胞培養(yǎng)液中加入4.3μM六氯苯,6小時(shí)后菌液經(jīng)過(guò)正己烷萃取,氣相分析結(jié)果顯示細(xì)胞培養(yǎng)液中六氯苯絕大部分已經(jīng)完全降解(只有痕量的六氯苯殘余),降解速度為0.67 nmol·mg(細(xì)胞干重)-1·h-1。 由于ATCC39723降解五氯酚的相關(guān)代謝基因的表達(dá)需要底物五氯酚的...

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【部分圖文】：

圖1-1工程菌Pseudomonasaeruginosa中構(gòu)建的2-氯甲苯降解途徑[86]

PA142和JB2都不能將2-氯甲苯作為唯一的碳源生長(zhǎng)[86]。如圖1-1所示。圖1-1工程菌Pseudomonasaeruginosa中構(gòu)建的2-氯甲苯降解途徑[86]Fig.1-1Assemblyofanovelpathwayforbiodegrad....

圖1-2鞘氨醇假單胞菌ATCC39723中五氯酚的降解途徑[118]

[118]。圖1-2鞘氨醇假單胞菌ATCC39723中五氯酚的降解途徑[118]Fig1-2PCPdegradationpathwayinSphingobiumchlorophenolicumATCC39723[118].PcpB,PCP4-monooxyg....

圖1-3ATCC39723中相關(guān)五氯酚降解基因簇pcpEMAC和pcpBDR的基因排列方式

圖1-3ATCC39723中相關(guān)五氯酚降解基因簇pcpEMAC和pcpBDR的基因排列方式[118]Fig.1-3GeneorganizationofthepcpEMACfragmentandthepcpBDRfragmentinATCC39723.Th....

圖2-2pZWY010的構(gòu)建Fig2.2ConstructionoftheepressionvectorpZWY010camA+,camB+和camC分別表示編碼putidaredoxinreductase(PdR)，putidaredoxin(Pd)和cytochromeP-450突變體F87W/Y96F/L244A/V247L/C334A；bla，氨芐抗性基因

圖2-2pZWY010的構(gòu)建Fig2.2ConstructionoftheepressionvectorpZWY010,camB+和camC分別表示編碼putidaredoxinreductase(PdR)，putidarP-450cam突變體....

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