氨氮是養(yǎng)殖水體中常見(jiàn)的重要污染脅迫因子。本文通過(guò)對(duì)三疣梭子蟹解毒代謝關(guān)鍵酶基因的克隆與表達(dá)分析，測(cè)定解毒代謝關(guān)鍵酶活力和相關(guān)產(chǎn)物含量的變化，研究了氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹氨氮轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝途徑相關(guān)指標(biāo)的影響，初步探討了三疣梭子蟹在氨氮脅迫下的解毒代謝機(jī)制。本論文主要包括以下三方面內(nèi)容：（1）三疣梭子蟹解毒代謝關(guān)鍵基因的克隆與序列分析；（2）氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的影響；（3）氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹代謝途徑的影響。主要結(jié)果如下： 1三疣梭子蟹解毒代謝關(guān)鍵基因的克隆與序列分析 通過(guò)設(shè)計(jì)兼并引物，利用RT-PCR方法從三疣梭子蟹鰓絲和肝胰臟分別克隆得到Rh蛋白和谷氨酸脫氫酶（GDH）部分基因序列。本實(shí)驗(yàn)克隆Rh蛋白基因所用的上、下游引物分別是5’-TGGGCCATCCTGGTGaayggnttytt-3’和5’-GGCGGCGccccanggrtg-3’，克隆得到的Rh蛋白cDNA片段長(zhǎng)612bp，編碼204個(gè)氨基酸序列，Rh蛋白氨基酸序列與其它蟹類(lèi)相似性為86%-91%；克隆GDH所使用的上游引物序列是5’-ATGATCGGCATCACCccnggntgggg-3’，下游引物序列是5’-TGG...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 氨氮來(lái)源與危害
        1.1 養(yǎng)殖水體中氨氮的來(lái)源
        1.2 氨氮對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的危害
    2 水產(chǎn)動(dòng)物在氨氮脅迫下解毒代謝機(jī)制的研究進(jìn)展
        2.1 魚(yú)類(lèi)在氨氮脅迫下解毒代謝代謝機(jī)制的研究進(jìn)展
        2.2 甲殼動(dòng)物在氨氮脅迫下解毒代謝代謝機(jī)制的研究進(jìn)展
        2.3 Rh 蛋白介導(dǎo)水產(chǎn)動(dòng)物氨氮轉(zhuǎn)運(yùn)的研究進(jìn)展
            2.3.1 Rh 蛋白基因家族簡(jiǎn)介
            2.3.2 Rh 蛋白介導(dǎo)魚(yú)類(lèi)氨氮轉(zhuǎn)運(yùn)的研究進(jìn)展
            2.3.3 Rh 蛋白介導(dǎo)甲殼動(dòng)物氨氮轉(zhuǎn)運(yùn)的研究進(jìn)展
            2.3.4 Rh 蛋白其它功能
第二章 三疣梭子蟹解毒代謝關(guān)鍵基因的克隆與序列分析
    第一節(jié) 三疣梭子蟹 Rh 蛋白基因的克隆與序列分析
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 實(shí)驗(yàn)方法
                1.2.1 總 RNA 提取
                1.2.2 cDNA 模板的合成
                1.2.3 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)
                1.2.4 目的片段回收
                1.2.5 T 載體的連接
                1.2.6 目的片段的轉(zhuǎn)化與測(cè)序
        2 結(jié)果與討論
            2.1 Rh 蛋白基因 cDNA 片段的克隆分析
            2.2 Rh 蛋白基因的序列與同源性分析
            2.3 Rh 蛋白分子進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
    第二節(jié) 三疣梭子蟹谷氨酸脫氫酶基因的克隆與序列分析
        1 材料與方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2 結(jié)果與討論
            2.1 GDH 基因 cDNA 片段的克隆分析
            2.2 GDH 基因的序列與同源性分析
            2.3 GDH 基因分子進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
第三章 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的影響
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 氨氮濃度設(shè)置
        1.3 樣品制備
        1.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測(cè)定方法
            1.4.1 含氮化合物含量的測(cè)定
            1.4.2 谷氨酰胺合成途徑關(guān)鍵酶活力的測(cè)定
            1.4.3 谷氨酰胺合成途徑關(guān)鍵酶 mRNA 表達(dá)分析測(cè)定
                1.4.3.1 總 RNA 提取
                1.4.3.2 去除基因組 DNA
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果
        2.1 氨氮對(duì)三疣梭子蟹血淋巴氨氮含量的影響
        2.2 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹鰓轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的影響
        2.3 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹肝胰臟轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的影響
        2.4 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹肌肉轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的影響
        2.5 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹血淋巴轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的影響
    3 討論
        3.1 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹組織 Rh 蛋白基因表達(dá)影響的研究
        3.2 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹組織谷氨酰胺合成途徑影響的研究
    4 總結(jié)
第四章 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹代謝途徑的影響
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 氨氮濃度設(shè)置
        1.3 樣品制備
        1.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測(cè)定方法
            1.4.1 含氮化合物含量的測(cè)定
            1.4.2 黃嘌呤氧化還原酶與精氨酸酶活力的測(cè)定
                1.4.2.1 黃嘌呤氧化還原酶活力的測(cè)定
                1.4.2.2 精氨酸酶活力的測(cè)定
            1.4.3 黃嘌呤脫氫酶與精氨酸酶 mRNA 表達(dá)量的分析測(cè)定
        1.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果
        2.1 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹鰓絲代謝途徑的影響
        2.2 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹肝胰臟代謝途徑的影響
        2.3 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹肌肉代謝途徑的影響
        2.4 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹血淋巴代謝途徑的影響
    3 討論
        3.1 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹組織尿酸合成途徑影響的研究
        3.2 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹組織尿素合成途徑影響的研究
    4 總結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3763952