發(fā)布時(shí)間：2021-12-19 05:47

　　芳香烴是一種重要的有機(jī)物，在環(huán)境中分布廣泛，對(duì)人類健康和生態(tài)環(huán)境具有很大危害性。由于芳香烴獨(dú)特物理化學(xué)結(jié)構(gòu)，采用微生物一生物技術(shù)途徑治理、清除或降解轉(zhuǎn)化芳香烴類化合物污染是一種有效的方法。在后基因組時(shí)代，生物學(xué)研究重心從揭示生命的所有遺傳信息轉(zhuǎn)移到在整體水平上對(duì)生物功能的研究，其中，以蛋白質(zhì)的功能和相互作用為主要目標(biāo)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究成為最近的一個(gè)熱點(diǎn)。由于芳香烴是一種環(huán)境異生物質(zhì)，微生物更多的是可能通過形成誘導(dǎo)酶系具備了新的代謝功能，同時(shí)，降解菌在實(shí)際環(huán)境中還面臨多種污染因子的脅迫，通過對(duì)壓力脅迫下降解菌蛋白質(zhì)組學(xué)分析，能夠識(shí)別壓力應(yīng)答的蛋白以及參與環(huán)境污染物代謝的酶，有助于我們深入了解生物降解的過程，也為探討微生物的進(jìn)化趨勢(shì)和潛在的進(jìn)化機(jī)制提供了證據(jù)。本項(xiàng)研究以環(huán)境中典型的芳烴污染物為研究對(duì)象，篩選分離獲得了具芳香烴降解能力的菌株；采用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，分析了降解菌在不同壓力脅迫下降解途徑中的蛋白表達(dá)差異，在納米水平，觀察分析了降解菌在污染物脅迫下細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)的變化，并采用反向PCR等分子生物學(xué)方法，克隆與分析了降解途徑中的誘導(dǎo)酶。本研究所獲主要結(jié)論如下：（1）從東北老工業(yè)基地長(zhǎng)期... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

一l蛋白質(zhì)組的研究策略

體水平上研究蛋白質(zhì)表達(dá)及其功能顯得日益重要。2蛋白質(zhì)組學(xué)的主要研究策略與技術(shù)路線由于對(duì)全部蛋白質(zhì)的研究是非常困難的，在研究路線上有兩種截然不同的策略(圖2一1)。一種可稱為“竭澤法”，即采用高通量的蛋白質(zhì)組研究技術(shù)分析生物體盡可能多甚至接近所有蛋白質(zhì)，這是一個(gè)符合蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)的策略，但具體實(shí)施困難太大。另一種策略可稱為“功能法”，即研究不同時(shí)期細(xì)胞蛋白質(zhì)組成的變化，如蛋白質(zhì)在不同環(huán)境卜的斧異表達(dá)，以發(fā)現(xiàn)有差異蛋白質(zhì)種類為土要日標(biāo)。圖2一l蛋白質(zhì)組的研究策略目前蛋白質(zhì)組學(xué)的主要方法可按結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)織學(xué)和功能蛋白質(zhì)組學(xué)分為兩大類。結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)研究的方面主要包括〔圖2一2)，〔1)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測(cè)定土要以X一光衍射為土要研究手段;(2)分析測(cè)定蛋白質(zhì)種類及數(shù)量以雙向電泳為土要手段，現(xiàn)在一張雙向電泳圖譜可辨出5000個(gè)~10000個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn);(3)質(zhì)譜是對(duì)蛋白質(zhì)鑒定的基本手段。在功能蛋白質(zhì)組學(xué)方面，比較常用的研究方法有酵母雙雜交系統(tǒng)(及衍生出的單雜交系統(tǒng)、二雜交系統(tǒng))和反向雜交系統(tǒng)、免疫共沉淀技術(shù)、表面等離子技術(shù)、熒光能量轉(zhuǎn)移技術(shù)等。

如圖2一3所示，每個(gè)刺激子調(diào)控不同的分子。在A.t姍efacz’ens中，通過野生株與突變株在已知調(diào)控元件中的比對(duì)結(jié)果，區(qū)分出了RpoH一和HrcA依賴的調(diào)控子〔Rosenet刁了.，200幻。研究表明，在熱休克蛋白中，已知的調(diào)節(jié)子調(diào)控不到一平的熱休克蛋自的表達(dá):A.t姍日角cz’en沖還存在有更多未知的熱休克蛋白的調(diào)控子�？诳诳�·口‘回。于圖2一3壓力刺激子功能間的相互重疊關(guān)系在蛋白質(zhì)組學(xué)的早期研究中，主要關(guān)注活細(xì)胞暴露在芳烴化合物和壓力條件下的蛋白表達(dá)差異。如:Pseu故姍 Onasae八 ]gZDo朋注硫酸鹽缺乏條件卜的蛋白表達(dá)〔 Quadronietal.，1999〕

【參考文獻(xiàn)】：
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