近年來,赤潮在世界各地海域頻繁爆發(fā),且規(guī)模不斷擴大,造成了巨大的經(jīng)濟損失,并危害了人類的生存環(huán)境。亞歷山大藻（Alexandrium）是一種全球分布的常見赤潮藻種,其屬下的30余種甲藻約一半為有毒種類,進行亞歷山大藻發(fā)生及防治的研究對于由其引發(fā)的赤潮的防治具有重要意義。 人們已對誘發(fā)亞歷山大藻赤潮發(fā)生的環(huán)境因子做了一些研究,這些研究多集中在營養(yǎng)鹽（氮、磷等）對亞歷山大藻增殖的影響上,隨著研究的深入,人們開始重視微量重金屬元素（鐵、錳等）對藻增殖的影響。殺滅赤潮生物的主要方法有粘土法、化學(xué)藥劑法等。利用硫酸銅治理赤潮曾是國內(nèi)外長期采用的方法,但直接利用硫酸銅易造成局部濃度過高,進而對非赤潮生物及海洋生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生不利影響。目前國際上公認的一種治理赤潮方法是撒播粘土法,在過去25年中,許多國家對其進行了研究。盡管粘土被人們視為是一種有效且有發(fā)展?jié)摿Φ目刂瞥喑狈椒?但粘土的局部不適用、高昂的運輸費用以及短效性,使得這種方法的應(yīng)用受到了限制。因此,尋找新型殺藻劑并研究其殺藻效果及殺藻機制意義重大。 本研究以亞歷山大藻LC3為研究材料,對其發(fā)生赤潮條件進行初步研究,并利用電鏡技術(shù)、雙向... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：143 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 赤潮及其危害性
    1.2 赤潮發(fā)生原因及研究進展
        1.2.1 生物因素
        1.2.2 化學(xué)因素
        1.2.3 物理因素
    1.3 赤潮防治技術(shù)及研究進展
        1.3.1 物理方法
        1.3.2 化學(xué)方法
        1.3.3 生物方法
        1.3.4 赤潮防治技術(shù)的研究進展
    1.4 亞歷山大藻赤潮的危害性
        1.4.1 產(chǎn)毒亞歷山大藻的毒害機理
        1.4.2 亞歷山大藻的防治
    1.5 差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究及其在海洋生物中的應(yīng)用
        1.5.1 蛋白質(zhì)組學(xué)研究的背景及意義
        1.5.2 差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究
        1.5.3 常用的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法
        1.5.4 差異蛋白質(zhì)組學(xué)在海洋生物中的應(yīng)用
2 氮、磷、鐵、錳對亞歷山大藻LC3生長的影響
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 培養(yǎng)條件
        2.1.4 正交表設(shè)計
        2.1.5 生長測定
    2.2 結(jié)果與討論
        2.2.1 氮、磷、鐵、錳對亞歷山大藻LC3生長速率的影響
        2.2.2 討論
    2.3 結(jié)語
3 不同殺滅劑對亞歷山大藻LC3滅除的初步研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 藻細胞計數(shù)方法
        3.1.3 不同濃度辣椒素滅殺亞歷山大藻LC3的測定
        3.1.4 不同濃度過碳酸鈉滅殺亞歷山大藻LC3的測定
        3.1.5 硫酸銅、谷氨酸銅對亞歷山大藻LC3滅殺對比
        3.1.6 谷氨酸銅濃度對亞歷山大藻LC3存活率的影響
        3.1.7 復(fù)合作用下HDTMAB濃度對亞歷山大藻LC3存活率的影響
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 不同濃度辣椒素對亞歷山大藻LC3的殺滅結(jié)果
        3.2.2 不同濃度過碳酸鈉對亞歷山大藻LC3的殺滅結(jié)果
        3.2.3 硫酸銅、谷氨酸銅殺滅亞歷山大藻LC3對比試驗結(jié)果
        3.2.4 不同濃度谷氨酸銅對亞歷山大藻LC3的殺滅結(jié)果
        3.2.5 復(fù)合作用下HDTMAB濃度對谷氨酸銅殺滅亞歷山大藻LC3的影響
    3.3 討論
        3.3.1 辣椒素及過碳酸鈉對亞歷山大藻LC3的滅除
        3.3.2 谷氨酸銅對亞歷山大藻LC3的滅除
        3.3.3 HDTMAB對谷氨酸銅殺滅亞歷山大藻LC3的促進
    3.4 結(jié)語
4 硫酸銅、谷氨酸銅以及表面活性劑對亞歷山大藻LC3形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響
    4.1 材料和方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 不同處理下亞歷山大藻LC3的培養(yǎng)
        4.1.3 亞歷山大藻LC3細胞形態(tài)的掃描電鏡觀察
        4.1.4 亞歷山大藻LC3細胞超微結(jié)構(gòu)的透射電鏡觀察
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 無脅迫時亞歷山大藻LC3的細胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)
        4.2.2 谷氨酸銅脅迫對亞歷山大藻LC3細胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響
        4.2.3 谷氨酸銅和HDTMAB協(xié)同脅迫對亞歷山大藻LC3細胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響
        4.2.4 HDTMAB脅迫對藻細胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響
        4.2.5 硫酸銅脅迫對藻細胞形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的影響
    4.3 討論
        4.3.1 脅迫對亞歷山大藻LC3質(zhì)膜的損傷
        4.3.2 脅迫對亞歷山大藻LC3葉綠體及線粒體的損傷
        4.3.3 亞歷山大藻LC3對脅迫毒性的響應(yīng)
    4.4 結(jié)語
5 谷氨酸銅和表面活性劑協(xié)同滅除亞歷山大藻LC3機制的初步研究
    5.1 材料和方法
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 谷氨酸銅對亞歷山大藻LC3細胞丙二醛、巰基含量及質(zhì)膜透性影響的測定
        5.1.3 復(fù)合作用下HDTMAB濃度對亞歷山大藻LC3細胞丙二醛、巰基含量及質(zhì)膜透性影響的測定
        5.1.4 TBA法測定丙二醛(MDA)含量
        5.1.5 DTNB顯色法測定巰基含量
        5.1.6 電導(dǎo)法測定細胞質(zhì)膜透性
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 谷氨酸銅脅迫對亞歷山大藻LC3細胞中丙二醛、巰基含量及細胞膜透性的影響
        5.2.2 復(fù)合作用下不同濃度HDTMAB對丙二醛、巰基含量及細胞膜透性的影響
    5.3 討論
        5.3.1 谷氨酸銅對亞歷山大藻LC3細胞生理活性的影響
        5.3.2 復(fù)合作用下HDTMAB濃度對亞歷山大藻LC3細胞生理活性的影響
    5.4 結(jié)語
6 外源Ca~(2+)對HDTMAB殺滅亞歷山大藻LC3效果的影響及其機制初步研究
    6.1 材料和方法
        6.1.1 實驗材料
        6.1.2 復(fù)合作用下Ca~(2+)濃度對亞歷山大藻LC3存活率影響的測定
        6.1.3 復(fù)合作用下Ca~(2+)濃度對亞歷山大藻LC3細胞丙二醛、巰基含量及質(zhì)膜透性影響的測定
    6.2 結(jié)果
        6.2.1 不同濃度Ca~(2+)對HDTMAB殺滅亞歷山大藻LC3的影響
        6.2.2 復(fù)合作用下濃度Ca~(2+)對亞歷山大藻LC3細胞丙二醛含量的影響
        6.2.3 復(fù)合作用下濃度Ca~(2+)對亞歷山大藻LC3細胞巰基含量的影響
        6.2.4 復(fù)合作用下濃度Ca~(2+)對亞歷山大藻LC3細胞質(zhì)膜透性的影響
    6.3 討論
    6.4 結(jié)語
7 亞歷山大藻LC3蛋白質(zhì)組雙向電泳圖譜的構(gòu)建
    7.1 材料和方法
        7.1.1 實驗材料
        7.1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳蛋白樣品制備
        7.1.3 雙向凝膠電泳蛋白樣品的提取和定量
        7.1.4 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離
        7.1.5 雙向凝膠電泳分離
        7.1.6 染色
        7.1.7 圖像分析及數(shù)據(jù)處理
    7.2 結(jié)果
        7.2.1 亞歷山大藻LC3細胞可溶性蛋白質(zhì)SDS-PAGE結(jié)果
        7.2.2 亞歷山大藻LC3細胞可溶性蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果
    7.3 討論
        7.3.1 亞歷山大藻LC3細胞破碎
        7.3.2 亞歷山大藻LC3雙向電泳樣品溶解緩沖液
        7.3.3 亞歷山大藻LC3雙向電泳樣品濃縮及脫鹽
    7.4 結(jié)語
8 利用SDS-PAGE和雙向電泳技術(shù)進行谷氨酸銅滅除亞歷山大藻LC3的機制研究
    8.1 材料和方法
        8.1.1 實驗材料
        8.1.2 藻種處理及蛋白提取、電泳分離
    8.2 結(jié)果
        8.2.1 復(fù)合作用下HDTMAB濃度對亞歷山大藻LC3蛋白表達影響的SDS-PAGE結(jié)果
        8.2.2 谷氨酸銅對亞歷山大藻LC3細胞蛋白表達影響的雙向電泳結(jié)果
    8.3 討論
        8.3.1 復(fù)合作用下HDTMAB對亞歷山大藻LC3蛋白表達的影響
        8.3.2 谷氨酸銅對亞歷山大藻LC3蛋白表達的影響
    8.4 結(jié)語
9 亞歷山大藻LC3蛋白質(zhì)雙向電泳差異蛋白肽質(zhì)量指紋圖譜分析與鑒定
    9.1 材料和方法
        9.1.1 實驗材料
        9.1.2 質(zhì)譜樣品的制備
        9.1.3 質(zhì)譜樣品分析
        9.1.4 數(shù)據(jù)庫查詢
    9.2 結(jié)果
    9.3 討論
        9.3.1 谷氨酸銅脅迫下1，5-二磷酸核酮糖羧化酶表達的抑制
        9.3.2 谷氨酸銅脅迫下RNA聚合酶表達的抑制
        9.3.3 谷氨酸銅脅迫下新蛋白的表達
    9.4 結(jié)語
10 結(jié)論
    10.1 氮、磷、鐵、錳對亞歷山大藻LC3生長均有促進作用
    10.2 谷氨酸銅和HDTMAB可有效殺滅亞歷山大藻LC3
    10.3 亞歷山大藻LC3形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)在硫酸銅、谷氨酸銅以及表面活性劑等脅迫下發(fā)生變化
    10.4 谷氨酸銅和表面活性劑作用下亞歷山大藻LC3膜透性、丙二醛及巰基含量發(fā)生變化
    10.5 外源Ca~(2+)對HDTMAB殺滅亞歷山大藻LC3的抑制及其機制
    10.6 通過利用pH 3.0~10.0及pH 3.0~5.6的IPG預(yù)制膠條構(gòu)建亞歷山大藻LC3蛋白質(zhì)組雙向電泳圖譜
    10.7 利用SDS-PAGE和雙向電泳技術(shù)研究谷氨酸銅滅除亞歷山大藻LC3的機制
    10.8 谷氨酸銅脅迫下亞歷山大藻LC3蛋白質(zhì)雙向電泳差異蛋白肽質(zhì)量指紋圖譜分析與鑒定
參考文獻
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3429039