發(fā)布時間：2021-08-26 08:45

　　近些年來,研究發(fā)現(xiàn)一些存在于環(huán)境中的化學物質具有類似內分泌激素的作用,可以導致生物體內分泌系統(tǒng)紊亂,因此將這類物質統(tǒng)稱為環(huán)境激素（Environmental Endocrine, EE）。EE在環(huán)境中分布廣泛且多為脂溶性的有機小分子,化學性質特別穩(wěn)定,在體內和體外都不易分解,通過食物鏈進入生物體內后,可蓄積于脂肪組織內,從而對人和其他生物體的生殖與發(fā)育系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及神經系統(tǒng)等造成傷害。目前,EE已威脅到人和動物的生殖健康甚至物種的繁衍。為了保護生態(tài)環(huán)境,預防環(huán)境激素污染物（Environmental Endocrine Pollutants, EEP）通過食物鏈進入人體,發(fā)展靈敏、快速及成本低的分析檢測技術是非常必要的。目前,EEP主要使用GC-MS、HPLC及LC-MS來進行分析與確證,但是存在樣品前處理過程復雜、操作繁瑣、儀器昂貴、檢測成本偏高等缺點,不能很好地滿足日常分析及現(xiàn)場檢測的需求。而免疫學方法由于具有靈敏度高、特異性強、操作方便和成本低等優(yōu)點,已被應用于EEP的日常分析檢測,特別適用于對大量樣品進行分析篩選。然而目前多數(shù)免疫分析方法通常一次實驗僅能分析一種EEP,而樣品... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：146 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
部分英文縮略詞
第一章 文獻綜述
    1 環(huán)境激素污染物
        1.1 引言
        1.2 環(huán)境激素污染物的來源
        1.3 環(huán)境激素污染物的種類
        1.4 環(huán)境激素污染物的危害
            1.4.1 對生殖和發(fā)育系統(tǒng)的影響
            1.4.2 對神經系統(tǒng)的影響
            1.4.3 對免疫系統(tǒng)的影響
            1.4.4 對腫瘤發(fā)生的影響
        1.5 環(huán)境激素污染物的分析方法
            1.5.1 環(huán)境激素污染物的GC-MS分析
            1.5.2 環(huán)境激素污染物的HPLC及LC-MS分析
            1.5.3 環(huán)境激素污染物的免疫分析技術
    2 液相懸浮芯片免疫分析的研究進展
        2.1 液相懸浮芯片免疫分析的發(fā)展歷史
        2.2 液相懸浮芯片免疫分析原理
        2.3 液相懸浮芯片免疫分析的優(yōu)點及面臨的問題
        2.4 液相懸浮芯片技術的發(fā)展方向
            2.4.1 樣品中檢測目標分子的數(shù)量將會有所突破
            2.4.2 各檢測評價指標仍有很大提升空間
            2.4.3 微球性能的提升
            2.4.4 微球的回收和再利用
            2.4.5 檢測儀器的小型化
        2.5 液相懸浮芯片技術的應用
            2.5.1 生物醫(yī)學領域的應用
            2.5.2 環(huán)境監(jiān)測及食品檢測領域的應用
        2.6 結論
    3 本研究的目的意義與內容
        3.1 研究目的和意義
        3.2 研究內容
第二章 完全抗原與抗體的制備
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要儀器
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要溶液的配制
        1.2 方法
            1.2.1 BPA完全抗原的制備
            1.2.2 2,4-D完全抗原的制備
            1.2.3 CHI完全抗原的制備
            1.2.4 完全抗原的表征
            1.2.5 抗BPA抗體的制備與鑒定
    2 結果與分析
        2.1 BPA完全抗原的制備與鑒定
            2.1.1 BVA-BSA的制備與鑒定
            2.1.2 cBSA的制備與鑒定
            2.1.3 BPA-cBSA的制備與鑒定
        2.2 2,4-D蛋白偶聯(lián)物的制備與鑒定
        2.3 CHI蛋白偶聯(lián)物的制備與鑒定
        2.4 抗體的鑒定
            2.4.1 抗體產生進程
            2.4.2 抗血清的靈敏度分析
            2.4.3 抗血清的特異性分析
    3 討論
        3.1 關于陽離子載體蛋白的作用
        3.2 小分子蛋白偶聯(lián)物的制備與鑒定
            3.2.1 載體蛋白的選擇
            3.2.2 生物偶聯(lián)方法的選擇
        3.3 抗體的特異性研究
第三章 ELISA研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要儀器與器材
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要溶液的配制
        1.2 方法
            1.2.1 常規(guī)間接競爭ELISA研究
            1.2.2 半抗原直接偶聯(lián)ELISA研究
    2 結果和分析
        2.1 常規(guī)ELISA研究
            2.1.1 封閉液的選擇
            2.1.2 包被原與抗體濃度的確定
            2.1.3 常規(guī)ELISA標準曲線的繪制
            2.1.4 抗體交叉反應性的測定
            2.1.5 常規(guī)ELISA添加回收率的測定
            2.1.6 總結
        2.2 半抗原直接偶聯(lián)ELISA研究
            2.2.1 封閉方式的選擇
            2.2.2 包被原與抗體濃度的確定
            2.2.3 標準曲線的繪制
            2.2.4 添加回收率的測定
        2.3 兩種ELISA的比較研究
    3 小節(jié)與討論
        3.1 影響ELISA參數(shù)的因素
            3.1.1 包被原與抗體濃度因素
            3.1.2 物化因素
        3.2 半抗原直接偶聯(lián)ELISA
第四章 液相芯片檢測方法的研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要儀器與器材
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要溶液的配制
        1.2 方法
            1.2.1 生物素化抗體的制備
            1.2.2 包被原與羧基熒光微球的偶聯(lián)
            1.2.3 熒光微球光鏡及掃描電鏡觀察
            1.2.4 蛋白質偶聯(lián)微球的確證
            1.2.5 檢測條件的優(yōu)化
            1.2.6 環(huán)境激素污染物Luminex標準曲線的繪制
            1.2.7 檢測的特異性實驗
            1.2.8 有機溶劑對微球的熒光漂白實驗
            1.2.9 懸浮芯片多通道檢測
            1.2.10 加標回收實驗
    2 結果與分析
        2.1 熒光微球的形態(tài)觀察
        2.2 包被原與羧基熒光微球的偶聯(lián)確證
        2.3 液相芯片檢測條件的優(yōu)化
            2.3.1 激活緩沖液的選擇
            2.3.2 液相芯片檢測模式的選擇
            2.3.3 生物素化二抗加樣方式的選擇
            2.3.4 生物素化二抗加入量的選擇
            2.3.5 SA-PE加入量的選擇
            2.3.6 SA-PE作用時間的選擇
            2.3.7 最佳抗體加入量的優(yōu)化
            2.3.8 最佳抗原抗體反應時間的選擇
            2.3.9 最佳抗原抗體反應容積的選擇
            2.3.10 抗原抗體反應緩沖液離子強度的選擇
            2.3.11 抗原抗體反應緩沖液類型的選擇
            2.3.12 孵育時間的選擇
            2.3.13 小結
        2.4 環(huán)境激素污染物檢測的懸浮芯片標準曲線
        2.5 特異性實驗
        2.6 有機溶劑對微球的熒光漂白實驗
        2.7 多通道檢測實驗
        2.8 加標回收實驗
    3 討論
        3.1 抗體及SA-PE的濃度
            3.1.1 一抗?jié)舛纫蛩?br>            3.1.2 生物素化二抗及SA-PE濃度因素
        3.2 檢測模式
        3.3 理化因素對IC50值的影響
            3.3.1 離子強度因素
            3.3.2 抗原抗體反應緩沖液類型
            3.3.3 時間因素
            3.3.4 反應容積因素
第五章 方法比對研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 主要儀器與器材
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要溶液的配制
        1.2 方法
            1.2.1 HPLC檢測標準曲線繪制
            1.2.2 加標回收率的測定
    2 結果和分析
        2.1 環(huán)境激素污染物HPLC檢測
        2.2 加標回收率
        2.3 環(huán)境激素污染物高通量懸浮芯片檢測法與其它方法的比較
    3 小結和討論
第六章 結論與展望
    1 主要結論
        1.1 制備了BPA的抗體,建立了檢測環(huán)境中BPA殘留的ELISA
        1.2 建立了檢測環(huán)境中BPA殘留的半抗原直接偶聯(lián)ELISA
        1.3 制備了2,4-D的包被原,建立了檢測環(huán)境中2,4-D殘留的ELISA
        1.4 制備了CHI的包被原,建立了檢測環(huán)境中CHI殘留的ELISA
        1.5 制備了BPA包被原與熒光微球的偶聯(lián)物,建立了檢測環(huán)境中BPA殘留的Luminex方法
        1.6 制備了2,4-D包被原與熒光微球的偶聯(lián)物,建立了檢測環(huán)境中2,4-D殘留的Luminex方法
        1.7 制備了CHI包被原與熒光微球的偶聯(lián)物,建立了檢測環(huán)境中CHI殘留的Luminex方法
        1.8 建立了同時檢測環(huán)境中BPA、2,4-D及CHI殘留的Luminex方法
        1.9 方法比對研究
    2 展望
        2.1 在抗體制備方面
        2.2 在ELISA研究方面
        2.3 在Luminex免疫分析研究方面
    3 創(chuàng)新點
參考文獻
致謝
附 攻讀博士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]氣相色譜-質譜法分析食品包裝材料中雙酚A[J]. 衛(wèi)碧文,繆俊文,于文佳.  分析試驗室. 2009(01)
[2]雙酚A人工抗原的光譜表征及免疫鑒定研究[J]. 鄭劼,張焜,趙肅清.  光譜學與光譜分析. 2008(07)
[3]無處不在的環(huán)境激素[J]. 顧娟紅.  中國檢驗檢疫. 2008(06)
[4]2007年全國農藥生產回顧及2008年展望[J]. 王律先.  中國農藥. 2008(02)
[5]半抗原免疫分析研究進展[J]. 吳瑜,胡昌勤,金少鴻.  藥物分析雜志. 2007(05)
[6]環(huán)境內分泌干擾物對機體的影響[J]. 范琰妍,張煒.  江蘇醫(yī)藥. 2007(05)
[7]環(huán)境內分泌干擾物研究的進展[J]. 曹巧玲,張俊明,高志賢,楊林,左小霞.  中華預防醫(yī)學雜志. 2007(03)
[8]環(huán)境內分泌干擾物的安全性評價研究進展[J]. 姜成哲,張乾坤,許正斗,哈鵬程.  中國比較醫(yī)學雜志. 2006(07)
[9]毒死蜱多克隆抗體的制備[J]. 桂文君,金仁耀,黃雅麗,朱國念.  農藥學學報. 2006(02)
[10]環(huán)境內分泌干擾物分析方法的研究與進展[J]. 趙利霞,林金明.  分析試驗室. 2006(02)

博士論文
[1]金黃色葡萄球菌B型腸毒素的溶液構象及菌體生長環(huán)境效應[D]. 王小紅.華中農業(yè)大學 2005



本文編號：3363930