轉(zhuǎn)基因蛋白Cry1Ab和黃曲霉毒素B1分別為最重要的轉(zhuǎn)基因作物成份和致癌性最強、天然發(fā)生的真菌毒素,皆關(guān)乎民生。開發(fā)針對這兩種毒素的快速檢測方法對于日益高漲的農(nóng)產(chǎn)品與食品安全檢測、環(huán)境監(jiān)測等需求有著十分重大的實用意義。本課題側(cè)重于方法學上的創(chuàng)新,Cry1Ab蛋白和AFB1分別為典型的大分子和小分子抗原,依此對象建立的新方法也可以相對容易地推廣到其它大分子和小分子分析物的檢測；為拓展到致病菌、農(nóng)藥小分子等檢測提供新的方法依據(jù),服務于農(nóng)業(yè)、食品、環(huán)境安全等。本課題綜合利用光學、免疫學、農(nóng)業(yè)與食品科學、材料科學、納米技術(shù)、生物化學、有機化學和分析化學等諸多領(lǐng)域的知識,以大分子的內(nèi)毒素（轉(zhuǎn)基因蛋白Cry1Ab）和小分子的真菌毒素（黃曲霉毒素B1, AFB1）為對象,研究了用于毒素檢測的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）新方法。通過自制的納米磁珠和商業(yè)化的核酸純化系統(tǒng),提升了免疫分析的自動化程度,建立了一種基于磁珠轉(zhuǎn)運的半自動ELISA （Mts-ELISA）;將Mts-ELISA成功應用于轉(zhuǎn)基因蛋白CrylAb的檢測,為研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的高通量、自動化免疫分析儀器提供了方法依據(jù)。探索性地提出了... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
目次
插圖清單
表格清單
英文縮略表
第一章 緒論
    提要
    1.1 研究背景
        1.1.1 毒素簡介
        1.1.2 轉(zhuǎn)基因作物及其風險
        1.1.3 黃曲霉毒素及其危害
    1.2 毒素或其相關(guān)衍生品的檢測方法概述
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因作物檢測方法概述
        1.2.2 黃曲霉毒素檢測方法概述
    1.3 免疫分析檢測毒素的國內(nèi)外研究進展
        1.3.1 轉(zhuǎn)基因作物免疫分析研究進展
        1.3.2 黃曲霉毒素免疫分析研究進展
    1.4 免疫分析方法用于毒素檢測所尚存的問題
    1.5 立題的目的意義和主要研究內(nèi)容
        1.5.1 選題的來源、目的和意義
        1.5.2 研究內(nèi)容和研究目標
        1.5.3 技術(shù)路線
第二章 基于磁珠轉(zhuǎn)運的半自動酶聯(lián)免疫吸附測定檢測甲胎蛋白
    提要
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 材料和試劑
        2.2.2 儀器設備
        2.2.3 通過水熱法合成Fe_3O_4磁珠
        2.2.4 磁珠的表面修飾
        2.2.5 制備固定有一抗的免疫磁珠(Ab-MBs)
        2.2.6 免疫分析
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 磁珠表征
        2.3.2 磁珠和AFP一抗之間生物鏈接的優(yōu)化
        2.3.3 比較Mts-ELISA與經(jīng)典ELISA
        2.3.4 比較Mts-ELISA與手動磁ELISA
    2.4 本章小結(jié)
第三章 基于磁珠轉(zhuǎn)運的半自動酶聯(lián)免疫吸附測定檢測轉(zhuǎn)基因蛋白Cry1Ab
    提要
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料和試劑
        3.2.2 儀器設備
        3.2.3 水熱法制備Fe_3O_4納米磁珠
        3.2.4 磁珠的表面修飾
        3.2.5 免疫磁珠的制備
        3.2.6 基于自動磁珠轉(zhuǎn)運的Mts-ELISA
        3.2.7 比色分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 Fe_3O_4納米磁珠的制備及表征
        3.3.2 磁珠的功能化
        3.3.3 免疫檢測與比色分析
        3.3.4 Mts-ELISA與商業(yè)化手動磁ELISA的對比
    3.4 本章小結(jié)
第四章 基于夾心體系的競爭性酶聯(lián)免疫吸附測定檢測黃曲霉毒素B1
    提要
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 材料和試劑
        4.2.2 儀器設備
        4.2.3 生物素標記抗體
        4.2.4 用高碘酸鈉法制備HRP標記的黃曲霉毒素抗體(HRP-anti-AFB1)
        4.2.5 夾心法檢測BSA-AFB1
        4.2.6 基于夾心法的競爭性ELISA檢測AFB1及優(yōu)化
            4.2.6.1 基于夾心法的競爭性ELISA檢測AFB1(Biotin-Ab/SA-PolyHRP40體系)
            4.2.6.2 基于夾心法的競爭性ELISA檢測AFB1(HRP-anti-AFB1體系,Sandwichbased competitive direct ELISA)
        4.2.7 與常規(guī)的直接競爭ELISA比較
        4.2.8 食品基質(zhì)的配制及基質(zhì)中的AFB1檢測
        4.2.9 檢測中的條件優(yōu)化及比較
    4.3 結(jié)果和討論
        4.3.1 生物素標記AFB1抗體
        4.3.2 HRP-anti-AFB1的制備與表征
        4.3.3 夾心法檢測“新抗原”BSA-AFB1
        4.3.4 基于夾心法的競爭性ELISA檢測AFB1(Biotin-Ab/SA-PolyHRP40體系)
        4.3.5 基于夾心法的競爭性ELISA檢測AFB1(HRP-anti-AFB1體系,第一批次)
        4.3.6 夾心競爭法檢測AFB1優(yōu)化(HRP-anti-AFB1體系,第二批次)
        4.3.7 夾心競爭法與直接競爭法的比較
        4.3.8 食品基質(zhì)中的方法評價
        4.3.9 部分操作條件的對比
    4.4 本章小結(jié)
第五章 基于聚合辣根過氧化物酶進行信號放大的間接ELISA檢測黃曲霉毒素B1
    提要
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 材料和試劑
        5.2.2 儀器設備
        5.2.3 生物素標記抗體
        5.2.4 間接競爭法檢測AFB1
        5.2.5 不同基質(zhì)的AFB1標準溶液配制
        5.2.6 曲線擬合
    5.3 結(jié)果和討論
        5.3.1 間接競爭法檢測AFB1(bioAb-SA體系)的條件優(yōu)化
        5.3.2 間接競爭法檢測AFB1(DeAb-TrAb體系)條件優(yōu)化
        5.3.3 bioAb-SA和DeAb-TrAb的系統(tǒng)比較
    5.4 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與展望
    提要
    6.1 主要研究結(jié)論
    6.2 主要創(chuàng)新點
    6.3 進一步研究展望
參考文獻
科研成果
作者簡介



本文編號：3305149