發(fā)布時(shí)間：2021-07-22 03:59

　　環(huán)境荷爾蒙的污染問(wèn)題已成為全球環(huán)境問(wèn)題之一，已引起世界各國(guó)極大地關(guān)注。近年來(lái)環(huán)境荷爾蒙的分析監(jiān)測(cè)方法研究主要有氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）、免疫分析。盡管色譜分析提供了高靈敏的檢測(cè)手段，然而色譜分析方法，不但儀器昂貴，而且須進(jìn)行繁雜的前處理，如加標(biāo)、萃取、凈化、濃縮等，一般分析一組試樣要花費(fèi)較長(zhǎng)的時(shí)間，且分析的費(fèi)用也較大，不便于推廣應(yīng)用。由于免疫分析的高特異性和操作簡(jiǎn)便、方便、經(jīng)濟(jì)，近年來(lái)在環(huán)境荷爾蒙分析檢測(cè)中的研究成為了研究的熱點(diǎn)。同時(shí)流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析方法具有靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好和便于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，已在藥物、環(huán)境分析中得到高度重視。本文從半抗原的改造、修飾到完全抗原的制備，免疫動(dòng)物產(chǎn)生抗體，建立免疫分析方法為主展開(kāi)工作，對(duì)雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、雙酚A等環(huán)境荷爾蒙進(jìn)行了分析方法研究，以便為環(huán)境荷爾蒙的研究提供更加靈敏、簡(jiǎn)便、快速的檢測(cè)手段。主要內(nèi)容如下：1．對(duì)雌二醇進(jìn)行了修飾，引入了連接臂，并與牛血清蛋白結(jié)合，合成了完全抗原，測(cè)定了抗原中雌二醇與蛋白質(zhì)的結(jié)合比為25：1。利用制備的完全抗原免疫大耳白家兔，制備了抗雌二醇多克隆抗體，ELISA測(cè)得抗血... 

【文章來(lái)源】：東華大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：191 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 環(huán)境荷爾蒙概述
        1.1.1 環(huán)境荷爾蒙概念的產(chǎn)生
        1.1.2 環(huán)境荷爾蒙問(wèn)題大事年表
        1.1.3 環(huán)境荷爾蒙的危害
        1.1.4 環(huán)境荷爾蒙的作用機(jī)制
        1.1.5 環(huán)境荷爾蒙的種類(lèi)
        1.1.6 我國(guó)對(duì)環(huán)境荷爾蒙問(wèn)題研究的重視
    1.2 目前環(huán)境荷爾蒙分析研究的現(xiàn)狀及分析檢測(cè)的發(fā)展方向
        1.2.1 環(huán)境荷爾蒙的分析檢測(cè)現(xiàn)狀
        1.2.2 環(huán)境荷爾蒙監(jiān)測(cè)分析的發(fā)展方向
    1.3 免疫分析基礎(chǔ)
        1.3.1 免疫分析概述
            1.3.1.1 抗體抗原反應(yīng)特性
            1.3.1.2 抗體作為分析試劑
            1.3.1.3 常用的標(biāo)記免疫分析原理
        1.3.2 免疫分析檢測(cè)方法
        1.3.3 展望
    1.4 本課題的主要研究?jī)?nèi)容
    1.5 參考文獻(xiàn)
第二章 雌二醇完全抗原的合成、抗體的制備
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)部分
        2.2.1 儀器與試劑
        2.2.2 雌二醇半抗原的修飾及完全抗原的制備
        2.2.3 雌二醇半抗原衍生物的鑒定
        2.2.4 雌二醇半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)結(jié)合物的鑒定
        2.2.5 免疫動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 抗血清效價(jià)的測(cè)定
        2.2.7 抗血清的特異性測(cè)定
        2.2.8 抗血清的純化
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 雌二醇-3-羧甲基醚的制備
        2.3.2 雌二醇-3-羧甲基醚的鑒定
        2.3.3 雌二醇-3-羧甲基醚-BSA的制備
        2.3.4 雌二醇-3-羧甲基醚-BSA結(jié)合物的結(jié)合比測(cè)定
        2.3.5 免疫動(dòng)物及抗血清效價(jià)的測(cè)定
        2.3.6 抗血清的特異性
        2.3.7 抗體的純化與保存
    2.4 小結(jié)
    2.5 參考文獻(xiàn)
第三章 利用生物素-親合素放大系統(tǒng)電化學(xué)酶聯(lián)免疫分析測(cè)定水中雌二醇
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)部分
        3.2.1 儀器與試劑
        3.2.2 緩沖溶液
        3.2.3 抗體的制備
        3.2.4 包被原的制備
        3.2.5 生物素化抗體的制備
        3.2.6 鄰苯二胺(OPD)-H_2O_2-HRP伏安分析方法
        3.2.7 ECIA測(cè)量步驟
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 鄰苯二胺的電化學(xué)特性
        3.3.2 酶催化反應(yīng)條件及伏安測(cè)量條件
        3.3.3 免疫反應(yīng)條件
        3.3.4 免疫測(cè)量模式及工作曲線
        3.3.5 樣品分析
    3.4 小結(jié)
    3.5 參考文獻(xiàn)
第四章 利用免疫反應(yīng)柱流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定雌二醇
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)部分
        4.2.1 試劑
        4.2.2 緩沖溶液
        4.2.3 抗體的制備
        4.2.4 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體
        4.2.5 免疫柱的制備
        4.2.6 儀器與操作步驟
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 免疫反應(yīng)模式
        4.3.2 流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光測(cè)量條件
        4.3.3 免疫反應(yīng)條件
        4.3.4 免疫柱的穩(wěn)定性
        4.3.5 測(cè)定雌二醇的工作曲線
        4.3.6 應(yīng)用
    4.4 小結(jié)
    4.5 參考文獻(xiàn)
第五章 雌三醇人工抗原的合成、抗體的制備
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)部分
        5.2.1 儀器與試劑
        5.2.2 雌三醇半抗原的修飾及完全抗原的制備
        5.2.3 雌三醇半抗原衍生物的鑒定
        5.2.4 雌三醇半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)結(jié)合物的鑒定
        5.2.5 免疫動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        5.2.6 抗血清效價(jià)的測(cè)定
        5.2.7 抗血清的特異性測(cè)定
        5.2.8 抗血清的純化
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 雌三醇-3-羧甲基醚的制備
        5.3.2 雌三醇-3-羧甲基醚的鑒定
        5.3.3 雌三醇-3-羧甲基醚-BSA的制備
        5.3.4 雌三醇-3-羧甲基醚-BSA結(jié)合物的結(jié)合比測(cè)定
        5.3.5 免疫動(dòng)物及抗血清效價(jià)的測(cè)定
        5.3.6 抗血清的特異性
        5.3.7 抗體的純化與保存
    5.4 小結(jié)
    5.5 參考文獻(xiàn)
第六章 甲基紅-H_2O_2-HRP伏安酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定雌三醇
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)部分
        6.2.1 儀器與試劑
        6.2.2 抗體的制備
        6.2.3 甲基紅(MR)-H_2O_2-HRP伏安分析體系的建立
        6.2.4 雌三醇的電化學(xué)免疫分析測(cè)定
    6.3 結(jié)果與討論
        6.3.1 甲基紅的電化學(xué)特性
        6.3.2 辣根過(guò)氧化物酶催化反應(yīng)條件
        6.3.3 HRP的測(cè)定
        6.3.4 伏安酶聯(lián)免疫分析測(cè)定雌三醇的條件
        6.3.5 測(cè)定雌三醇的工作曲線
        6.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)
        6.3.7 樣品測(cè)定
    6.4 小結(jié)
    6.5 參考文獻(xiàn)
第七章 流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定雌三醇
    7.1 引言
    7.2 實(shí)驗(yàn)部分
        7.2.1 試劑
        7.2.2 緩沖溶液
        7.2.3 抗體的制備
        7.2.4 包被原的制備
        7.2.5 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)抗體的制備
        7.2.6 免疫柱的制備
        7.2.7 儀器與操作步驟
    7.3 結(jié)果與討論
        7.3.1 免疫反應(yīng)模式
        7.3.2 流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光測(cè)量條件的選擇
        7.3.3 免疫反應(yīng)條件的選擇
        7.3.4 免疫反應(yīng)柱的穩(wěn)定性
        7.3.5 工作曲線與檢出限
        7.3.6 方法應(yīng)用
    7.4 小結(jié)
    7.5 參考文獻(xiàn)
第八章 己烯雌酚人工抗原的合成、抗體的制備
    8.1 引言
    8.2 實(shí)驗(yàn)部分
        8.2.1 主要儀器
        8.2.2 主要試劑
        8.2.3 己烯雌酚單羧甲基醚的合成
        8.2.4 己烯雌酚單羧甲基醚與載體蛋白的偶聯(lián)
        8.2.5 己烯雌酚抗體的制備
            8.2.5.1 多克隆抗體的制備
            8.2.5.2 兔血清抗體效價(jià)測(cè)定
            8.2.5.3 兔血清抗體的特異性
    8.3 結(jié)果與討論
        8.3.1 己烯雌酚單羧甲基醚半抗原的合成及鑒定
        8.3.2 己烯雌酚單羧甲基醚與載體蛋白結(jié)合及鑒定
            8.3.2.1 己烯雌酚單羧甲基醚與載體蛋白結(jié)合反應(yīng)
            8.3.2.2 偶聯(lián)驗(yàn)證
            8.3.2.3 結(jié)合比測(cè)定
        8.3.3 抗血清效價(jià)的鑒定
        8.3.4 抗體的特異性
        8.3.5 抗體的純化與保存
    8.4 小結(jié)
    8.5 參考文獻(xiàn)
第九章 電化學(xué)免疫分析方法測(cè)定己烯雌酚
    9.1 引言
    9.2 實(shí)驗(yàn)部分
        9.2.1 主要儀器
        9.2.2 主要試劑
        9.2.3 緩沖溶液
        9.2.4 抗體的制備
        9.2.5 包被原的制備
        9.2.6 測(cè)定方法
    9.3 結(jié)果與討論
        9.3.1 免疫反應(yīng)模式
        9.3.2 底物的選擇及測(cè)量條件
        9.3.3 免疫反應(yīng)條件
        9.3.4 工作曲線
        9.3.5 樣品分析
    9.4 小結(jié)
    9.5 參考文獻(xiàn)
第十章 流動(dòng)注射阻抑化學(xué)發(fā)光法測(cè)定己烯雌酚
    10.1 引言
    10.2 實(shí)驗(yàn)部分
        10.2.1 儀器與試劑
        10.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    10.3 結(jié)果與討論
        10.3.1 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)動(dòng)力學(xué)曲線
        10.3.2 反應(yīng)介質(zhì)的選擇
        10.3.3 魯米諾溶液用量的影響
        10.3.4 N-溴代丁二酰亞胺用量的影響
        10.3.5 工作曲線與檢出限
        10.3.6 共存物質(zhì)的影響
        10.3.7 樣品分析
    10.4 小結(jié)
    10.5 參考文獻(xiàn)
第十一章 雙酚A的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定
    11.1 引言
    11.2 實(shí)驗(yàn)部分
        11.2.1 儀器與試劑
        11.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    11.3 結(jié)果與討論
        11.3.1 化學(xué)發(fā)光信號(hào)曲線
        11.3.2 反應(yīng)介質(zhì)的選擇
        11.3.3 魯米諾溶液濃度的影響
        11.3.4 K_3Fe(CN)_6溶液濃度的影響
        11.3.5 工作曲線與檢出限
        11.3.6 干擾實(shí)驗(yàn)
        11.3.7 樣品分析
        11.3.8 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)機(jī)理初探
    11.4 小結(jié)
    11.5 參考文獻(xiàn)
第十二章 雙酚A完全抗原、抗體的制備及ECIA方法的建立
    12.1 引言
    12.2 實(shí)驗(yàn)部分
        12.2.1 主要儀器
        12.2.2 主要試劑
        12.2.3 完全抗原的制備及鑒定
        12.2.4 雙酚A抗體的制備
            12.2.4.1 多克隆抗體的制備
            12.2.4.2 抗血清效價(jià)的測(cè)定
        12.2.5 BPA的免疫分析
    12.3 結(jié)果與討論
        12.3.1 4,4-二苯基羥基戊酸與載體蛋白結(jié)合反應(yīng)
        12.3.2 偶聯(lián)驗(yàn)證
        12.3.3 結(jié)合比測(cè)定
        12.3.3 抗血清的效價(jià)鑒定
        12.3.4 抗血清的特異性
        12.3.5抗血清的免疫分析法應(yīng)用
            12.3.5.1 免疫反應(yīng)條件
            12.3.5.2 工作曲線
            12.3.5.3 血清及桶裝純凈水中BPA的測(cè)定
    12.4 小結(jié)
    12.5 參考文獻(xiàn)
第十三章 增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法測(cè)定雙酚A
    13.1 引言
    13.2 實(shí)驗(yàn)部分
        13.2.1 儀器與試劑
        13.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            13.2.2.1 包被原的制備
            13.2.2.2 抗雙酚A抗體的制備
            13.2.2.3 化學(xué)發(fā)光測(cè)定方法的建立
            13.2.2.4 雙酚A的測(cè)定
    13.3 結(jié)果與討論
        13.3.1 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)條件的選擇
        13.3.2 抗BPA抗血清濃度的選擇
        13.3.3 IgG-HRP稀釋比的選擇
        13.3.4 BPA測(cè)定的工作曲線及檢出限
        13.3.5 水樣中BPA的測(cè)定
    13.4 小結(jié)
    13.5 參考文獻(xiàn)
總結(jié)
攻讀博士學(xué)位期間已發(fā)表或待發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]生物素-親和素放大酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定雙酚A[J]. 魏孔吉,趙美萍,李元宗,常文保.  分析化學(xué). 2005(08)
[2]高效液相色譜法測(cè)定飲料類(lèi)食品中的類(lèi)雌激素[J]. 韓灝,邵兵,馬亞魯,吳國(guó)華,薛穎.  色譜. 2005(02)
[3]柱前熒光衍生-高效液相色譜法測(cè)定尿和血清中的環(huán)境雌激素[J]. 毛麗莎,孫成均,李永新,吳德生,趙劍虹.  分析化學(xué). 2005(01)
[4]水中雌激素的毛細(xì)管氣相色譜分析[J]. 李敬霞,周建科,李路華,岳強(qiáng).  化學(xué)研究. 2005(01)
[5]測(cè)定雙酚A的流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法研究[J]. 莊惠生,李金花,王瓊娥.  中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè). 2004(04)
[6]Different Biotinylation Strategies for Competitive Immunoassay of Estradiol[J]. 趙金富,王永成,李元宗,常文保.  Chinese Journal of Chemistry. 2004(07)
[7]酶聯(lián)免疫分析結(jié)合生物素-親合素放大體系測(cè)定血清中的雌三醇[J]. 趙金富,王永成,米健秋,常文保.  高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào). 2004(06)
[8]膠束電動(dòng)色譜法分離與測(cè)定己烯雌酚片劑中的有效成分[J]. 賈麗,邵海麗,高文華.  分析試驗(yàn)室. 2004(02)
[9]己烯雌酚單克隆抗體細(xì)胞株的篩選及間接ELISA法的建立[J]. 單國(guó)強(qiáng),劉雅紅,康彥龍.  中國(guó)獸醫(yī)科技. 2003(11)
[10]動(dòng)物組織中己烯雌酚殘留的基體固相擴(kuò)散-氣相色譜-質(zhì)譜分析方法研究[J]. 丁雅韻,徐曉云,謝孟峽,楊清峰,劉素英.  分析化學(xué). 2003(11)



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