偶氮染料的生物降解已得到較為深入的研究，分離得到多種具有偶氮染料脫色活性的微生物，并有數(shù)種偶氮還原酶基因經(jīng)大腸桿菌表達(dá)獲得高純度、高效率的偶氮還原酶，但是酶制劑的應(yīng)用受到各種條件的限制，成本較高。因此，考慮提高微生物本身的偶氮染料脫色活性，以便于工程應(yīng)用。 本文的目的是構(gòu)建一株具有較高偶氮染料脫色活性的基因工程菌，并考察其對(duì)偶氮染料的脫色特性。該工程菌是以沼澤紅假單胞菌／大腸桿菌穿梭質(zhì)粒為載體，將外源基因（來(lái)自球形紅細(xì)菌Rhodobacter sphaeroides AS1.1737的偶氮還原酶基因）導(dǎo)入受體菌（沼澤紅假單胞菌Rhodopseudomonas palustris AS1.2352），使受體菌表達(dá)外源偶氮還原酶，從而提高該工程菌的偶氮染料脫色能力。為達(dá)到以上目標(biāo)，首先，在工程菌構(gòu)建之前，通過(guò)考察外源偶氮還原酶基因的供體菌（球形紅細(xì)菌）和受體菌（沼澤紅假單胞菌）的偶氮染料脫色活性，以及受體菌細(xì)胞中質(zhì)粒DNA的種數(shù)及其復(fù)制等相關(guān)情況，驗(yàn)證該構(gòu)建途徑的可行性；進(jìn)而構(gòu)建穿梭質(zhì)粒及工程菌；最后，以原始受體菌為對(duì)照，考察工程菌的生長(zhǎng)及脫色特性。 對(duì)球形紅細(xì)菌Rhodoba... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

粗酶純化的垂直電泳圖

溫度(℃)圖3.11不同溫度下SDS對(duì)染料脫色的影響Fi.g3·11E月免ctofDSSondeeolorh，tionatdi月erernttemPearutesr無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基，含0.4%酵母膏，酸性紅Bsoom叭，30℃，光照缺出了不同溫度下，SDS(0.1%)對(duì)染料脫色影響。由圖可以

峨，seudomonas夕aulsrtsiAs1.2352野生質(zhì)粒的提取和鑒定.42.2.1野生質(zhì)粒的提取與回收用上述改進(jìn)的質(zhì)粒提取方法對(duì)該菌進(jìn)行初步提取操作，結(jié)果如圖.42所示，共顯示有8條較為明顯的DNA帶。

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