發(fā)布時間：2021-04-29 17:26

　　卵黃蛋白原（Vitellogenin,Vtg）是卵生動物中卵黃蛋白的前體,通常只存在于性成熟的雌性個體中。但是如果雄性或幼體暴露于環(huán)境雌激素環(huán)境,其體內(nèi)也能產(chǎn)生Vtg。因此,Vtg被認(rèn)為是一種理想的環(huán)境雌激素蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物,在研究各種化合物的雌激素效應(yīng)中被廣泛應(yīng)用。Vtg的純化多采用離子交換與凝膠滲透兩步驟法,耗時長,回收率低、Vtg容易降解。因此,有必要開發(fā)一種簡單、快速、回收率高的Vtg純化方法。目前Vtg的檢測主要采用特異性的免疫分析方法,方法靈敏,選擇性強;但耗時長,操作繁瑣。建立快速、簡便、可靠的Vtg檢測方法成為深入開展Vtg作為環(huán)境雌激素標(biāo)志物研究的關(guān)鍵前提。在環(huán)境雌激素毒性研究方面,大多數(shù)研究僅針對單一環(huán)境雌激素的毒性效應(yīng)展開,而對多種雌激素的復(fù)合污染和聯(lián)合效應(yīng)的研究較少。隨著我國沿海地區(qū)經(jīng)濟的不斷發(fā)展,大量污染物被排入大海,沿海及河口地區(qū)的污染日益加劇,開展持久性強、毒性大的環(huán)境雌激素對近海海洋生物聯(lián)合效應(yīng)的研究,因而具有重要意義。本研究將離子交換色譜和超濾離心技術(shù)相結(jié)合,建立了兩級純化Vtg的新方法;將內(nèi)源熒光法與紫外分光法相結(jié)合,建立了靈敏度高、線性范圍廣、操作... 

【文章來源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：128 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表(Abbreviations)
第一章 前言
    1.1 環(huán)境雌激素概述
        1.1.1 環(huán)境雌激素的種類和來源
            1.1.1.1 天然雌激素
            1.1.1.2 人工合成雌激素
            1.1.1.3 環(huán)境化學(xué)污染物
            1.1.1.4 重金屬類
        1.1.2 環(huán)境雌激素的危害
            1.1.2.1 環(huán)境雌激素對脊椎動物的危害
            1.1.2.2 環(huán)境雌激素對無脊椎動物的危害
        1.1.3 環(huán)境雌激素的篩選方法
            1.1.3.1 在體生物測試
            1.1.3.2 離體生物測試
    1.2 卵黃蛋白原研究概述
        1.2.1 卵黃蛋白原的生物特性
        1.2.2 卵黃蛋白原的分離純化
            1.2.2.1 超級離心法
            1.2.2.2 超濾法
            1.2.2.3 沉淀法
            1.2.2.4 液相色譜法
        1.2.3 卵黃蛋白原的分析方法
            1.2.3.1 特異性分析方法
            1.2.3.2 非特異性分析方法
    1.3 環(huán)境雌激素的聯(lián)合毒性作用研究概述
        1.3.1 環(huán)境雌激素聯(lián)合效應(yīng)的試驗方法
        1.3.2 聯(lián)合作用的評價方法
            1.3.2.1 聯(lián)合作用的預(yù)測結(jié)果與實驗結(jié)果比較法
            1.3.2.2 混合物的聯(lián)合效應(yīng)與單個最有效成分效應(yīng)比較法
            1.3.2.3 等效線法
            1.3.2.4 比值法
        1.3.3 雌激素的聯(lián)合效應(yīng)
            1.3.3.1 環(huán)境雌激素物質(zhì)之間的聯(lián)合效應(yīng)
            1.3.3.2 外源性雌激素與內(nèi)源性雌激素的聯(lián)合效應(yīng)
            1.3.3.3 環(huán)境雌激素與非雌激素物質(zhì)的聯(lián)合效應(yīng)
    1.4 本課題的提出及研究內(nèi)容
        1.4.1 立題背景
        1.4.2 研究目的
        1.4.3 研究內(nèi)容與技術(shù)路線
    第一章參考文獻
第二章 卵黃蛋白原的兩級純化與初步鑒定
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 儀器和試劑
        2.2.2 實驗動物
        2.2.3 卵黃蛋白原的誘導(dǎo)
        2.2.4 卵黃蛋白原的分離純化
            2.2.4.1 卵黃蛋白原的初步純化—弱陰離子交換色譜法
            2.2.4.2 卵黃蛋白原粗組分的再純化—超濾純化濃縮
        2.2.5 二級純化效果的驗證
            2.2.5.1 高分辨強陰離子交換高效液相色譜分析
            2.2.5.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 血清蛋白的分離純化
            2.3.1.1 血清蛋白的初級純化—弱陰離子交換色譜分離
            2.3.1.2 血清蛋白的第二級純化濃縮—超濾法
        2.3.2 血清蛋白的電泳分析
            2.3.2.1 Native-PAGE電泳分析
            2.3.2.2 SDS-PAGE電泳分析
    2.4 本章小結(jié)
    第二章參考文獻
第三章 內(nèi)源熒光法與紫外分光法串聯(lián)測定魚血清中的Vtg
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 儀器和試劑
        3.2.2 實驗動物
        3.2.3 卵黃蛋白原的誘導(dǎo)
        3.2.4 卵黃蛋白原實驗室標(biāo)樣的獲得
        3.2.5 卵黃蛋白原紫外光譜的測定
        3.2.6 卵黃蛋白原熒光光譜的測定
        3.2.7 強陰離子交換高效液相色譜分析參數(shù)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 卵黃蛋白原的紫外光譜
        3.3.2 卵黃蛋白原的熒光光譜
        3.3.3 卵黃蛋白原的色譜分離
        3.3.4 方法的線性范圍、檢出限和重現(xiàn)性
        3.3.5 方法的應(yīng)用
    3.4 本章小結(jié)
    第三章參考文獻
第四章 Vtg作為生物標(biāo)志物在DES和EE_2對美國紅魚聯(lián)合毒性研究中的應(yīng)用
    4.1 引言
    4.2 實驗部分
        4.2.1 儀器和試劑
        4.2.2 實驗動物
        4.2.3 染毒實驗
            4.2.3.1 濃度梯度組
            4.2.3.2 時間序列組
        4.2.4 樣品預(yù)處理
        4.2.5 血清中卵黃蛋白原的測定
        4.2.6 強陰離子交換高校液相色譜分析參數(shù)
        4.2.7 血清蛋白總量的測定
        4.2.8 生理學(xué)指標(biāo)的計算
        4.2.9 數(shù)據(jù)處理
        4.2.10 劑量—效應(yīng)關(guān)系的擬合
        4.2.11 聯(lián)合效應(yīng)的預(yù)測方法
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 DES和EE_2對美國紅魚死亡率的影響
        4.3.2 DES和EE_2對美國紅魚肥滿度的影響
        4.3.3 DES和EE_2對肝胰臟指數(shù)的影響
        4.3.4 DES和EE_2對腎臟指數(shù)的影響
        4.3.5 DES和EE_2對血清總蛋白的影響
        4.3.6 DES和EE_2對Vtg含量的影響
        4.3.7 Vtg與各主要指標(biāo)的關(guān)系
        4.3.8 DES和EE_2的聯(lián)合效應(yīng)
            4.3.8.1 濃度—效應(yīng)關(guān)系
            4.3.8.2 聯(lián)合效應(yīng)
    4.4 本章小結(jié)
    第四章參考文獻
第五章 結(jié)語和展望
    5.1 本研究的貢獻
    5.2 本研究的不足之處
    5.3 研究展望
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3167871