自1990年代以來,世界各國開始重視內(nèi)分泌擾亂化學(xué)物質(zhì)的研究,并建立了多種以魚類（如Medaka、Fatheadminnow和Zebrafish等）為模式生物的活體（invivo）篩選技術(shù),而我國目前還沒有建立以本土魚類為模式生物的活體篩選系統(tǒng)。因而,本文選擇以在我國廣泛分布的觀賞性魚類――金魚作為模式生物,在制備兔抗金魚卵黃原蛋白多克隆抗血清的基礎(chǔ)上,開發(fā)了定性檢測金魚卵黃原蛋白的western-blot技術(shù);并首次建立了以雄性金魚卵黃原蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生為主要指標,以γ-谷胺酰轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶為輔助指標的環(huán)境雌激素篩選的指標體系,并成功地應(yīng)用在多種農(nóng)藥的環(huán)境雌激素活性的檢測中。采用凝膠過濾和離子交換兩種層析技術(shù),從E₂誘導(dǎo)的雄性金魚血漿中分離、純化了金魚卵黃原蛋白,采用糖、磷、脂蛋白染色技術(shù)證明分離、純化的蛋白為卵黃原蛋白,該卵黃原蛋白在非變性條件下分子量約為440kDa,在SDS變性條件下分子量約為84和60kDa。并利用分離、純化的金魚卵黃原蛋白,制備了兔抗金魚卵黃原蛋白多克隆抗血清,開發(fā)了檢測金魚卵黃原蛋白的western-blot技術(shù),1:2000倍稀釋的... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
0 前言
1 魚類卵黃原蛋白分離純化、檢測技術(shù)及環(huán)境雌激素作用途徑研究進展
    1.1 魚類卵黃原蛋白分離純化、檢測技術(shù)
    1.2 環(huán)境雌激素類化合物作用途徑研究
    1.3 研究展望
2 金魚卵黃原蛋白的分離純化及性質(zhì)鑒定
    2.1 材料與方法
    2.2 結(jié)果與分析
    2.3 討論
3 金魚卵黃原蛋白多克隆抗血清的制備及鑒定
    3.1 材料與方法
    3.2 結(jié)果與分析
    3.3 討論
4 E2誘導(dǎo)雄性金魚卵黃原蛋白的分泌
    4.1 材料與方法
    4.2 結(jié)果與分析
    4.3 討論
5 久效磷誘導(dǎo)雄性金魚分泌卵黃原蛋白的研究
    5.1 材料與方法
    5.2 結(jié)果與分析
    5.3 討論
6 多種農(nóng)藥的環(huán)境雌激素活性的篩選
    6.1 材料與方法
    6.2 結(jié)果與分析
    6.3 討論
7 鯽魚和鯉魚卵黃原蛋白的分離純化及與兔抗金魚卵黃原蛋白多克隆抗血清的交叉反應(yīng)
    7.1 材料與方法
    7.2 結(jié)果與分析
    7.3 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]煙臺市市售蔬菜有機磷農(nóng)藥殘留檢測分析[J]. 陳偉,郝玉鋒.  食品與藥品. 2005(06)
[2]蔬菜中擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留情況調(diào)查[J]. 王冬群,沈群超.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2004(06)
[3]有機磷農(nóng)藥環(huán)境雌激素樣的作用[J]. 盧鋒,喬玲.  解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2004(05)
[4]用MCF-7細胞檢測有機磷農(nóng)藥擬雌激素樣活性[J]. 鄭光,周志俊,戴旭峰,孫運光,顧錫安.  中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志. 2004(05)
[5]17β-雌二醇對雄性金魚卵黃原蛋白的誘導(dǎo)作用[J]. 邴欣,汝少國,Isoda Hiroko,姜明,王蔚,王詩紅.  水產(chǎn)學(xué)報. 2004(03)
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[7]鯽魚（Carassius auratus）卵黃蛋白原的ELISA檢測[J]. 李康,周忠良,于靜,王明山,余曉君.  中國環(huán)境科學(xué). 2003(03)
[8]氰戊菊酯對雄性大鼠生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的影響[J]. 胡靜熠,王守林,趙人,楊俊,陳景衡,宋玲,王心如.  中華男科學(xué). 2002(01)
[9]有機磷與擬除蟲菊酯農(nóng)藥的擬雌激素活性研究[J]. 陳海燕,王心如,肖繼皋,胡剛,宋玲,王守林,何鳳生.  中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志. 2001(04)
[10]固相萃取法測定水源水中的有機磷農(nóng)藥[J]. 康躍惠,張干,盛國英,傅家謨.  中國環(huán)境科學(xué). 2000(01)

碩士論文
[1]久效磷對雄性金魚環(huán)境雌激素效應(yīng)研究[D]. 邴欣.中國海洋大學(xué) 2003



本文編號：3149776