本文根據(jù)目前我國近海多環(huán)芳烴污染現(xiàn)狀，以近海養(yǎng)殖重要經(jīng)濟(jì)貝類菲律賓蛤仔（Venerupis philippinarum）為研究對象，克隆了菲律賓蛤仔芳烴受體介導(dǎo)的解毒代謝途徑幾種關(guān)鍵基因，包括芳烴受體蛋白（AhR）、芳烴受體核轉(zhuǎn)位因子（ARNT）、熱休克蛋白90（HSP90）。研究了毒性最強(qiáng)的多環(huán)芳烴（PAHs）——苯并（a）芘（BaP）對菲律賓蛤仔組織解毒代謝相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控規(guī)律，通過對在BaP脅迫下菲律賓蛤仔解毒代謝相關(guān)基因的克隆及基因表達(dá)分析，探究雙殼貝類PAHs解毒代謝機(jī)制；構(gòu)建了菲律賓蛤仔PAHs消減cDNA文庫，篩選、鑒定了差異表達(dá)基因，結(jié)合室內(nèi)實(shí)驗(yàn)和海區(qū)現(xiàn)場驗(yàn)證，初步建立了基于菲律賓蛤仔的PAHs分子生物標(biāo)志物監(jiān)測技術(shù)，為海洋環(huán)境污染監(jiān)測和水產(chǎn)品安全評價提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和技術(shù)支持。1菲律賓蛤仔芳烴受體（AhR）介導(dǎo)的關(guān)鍵基因克隆與表達(dá)分析菲律賓蛤仔芳烴受體蛋白（VpAhR）的cDNA全序列長2870bp，開放閱讀框（ORF）長為2391bp，共編碼796個氨基酸殘基，不具備信號肽，屬于胞內(nèi)蛋白，含有2個核定位序列（NLS）：K45RRRR49和P67SKRHRE73。BLA... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：161 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

接觸標(biāo)志物、效應(yīng)標(biāo)志物、易感性標(biāo)志物的相互關(guān)系

.2 抑制性消減雜交原理及主要技術(shù)流程.2.1 抑制性消減雜交原理SSH 技術(shù)的原理可概括為―消同富異‖，即消減同源序列，富集差異序列（慶和景志忠, 2009）。抑制性 PCR 是通過利用含引物序列的雙鏈接頭（Adap 和 Adaptor 2R）充當(dāng)引物模板，使兩端接上同一接頭的非目的雙鏈片段（具向末端重復(fù)序列），在退火時產(chǎn)生―鍋-柄‖結(jié)構(gòu)（pan-like structure，見圖 1-2法與引物配對，從而選擇性抑制非目的序列的擴(kuò)增，以達(dá)到抑制非目的片段擇性擴(kuò)增目標(biāo)片段的目的（百度百科, 2010）。該方法運(yùn)用雜交二級動力學(xué)原理豐度高的單鏈 cDNA 在退火時產(chǎn)生同源雜交的速度要快于豐度低的單DNA，使原來在豐度上有差別的單鏈 cDNA 相對含量達(dá)到均等化，即低豐度表達(dá)的基因不會被丟失，而高豐度差異表達(dá)的基因又不會被過量的分離。消交過程扣除了不同處理組基因群（Tester 和 Driver）間的同源序列（岳桂008）。

為 21 世紀(jì)影響人類生存與健康的三大環(huán)境問題。多環(huán)芳烴（Polynumatic hydrocarbons, PAHs）是被聯(lián)合國列為 27 種重要的 PTS 之一（江桂05）的污染物，相當(dāng)部分 PAHs 具有致癌、致畸和致突變性，其中苯并（（BaP）的致癌性最強(qiáng)（岳敏等, 2003），因此常作為 PAHs 的典型代表用中 PAHs 污染狀況評估。近年來，PAHs 在脊椎動物體內(nèi)的解毒代謝途徑及相關(guān)機(jī)制的研究已取要進(jìn)展（劉移民, 2001; 安社娟, 2005）。研究表明，PAHs 進(jìn)入細(xì)胞后先與體（AhR）及 HSP 90 復(fù)合體結(jié)合，進(jìn)入細(xì)胞核后結(jié)合了配體（如 PAHsR 再與核內(nèi)芳烴受體核轉(zhuǎn)位因子（ARNT）結(jié)合，HSP 90 復(fù)合體隨即解R/ARNT 復(fù)合體識別并結(jié)合在位于 CYP1A1 等基因的 5’上游區(qū)域的外來反應(yīng)元件（XREs）上，從而增強(qiáng)了 CYP1A1、GST 等基因的轉(zhuǎn)錄，同時 AhR 自身的轉(zhuǎn)錄（劉移民, 2001; 安社娟, 2005）（見圖 2-1）。然而，目前有關(guān)雙殼貝類 AhR 介導(dǎo)的 PAHs 解毒代謝途徑方面的研究尚屬空白。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]櫛孔扇貝在B[a]P脅迫下生物標(biāo)志物篩選的研究[J]. 潘魯青,劉娜,王靜.  水生生物學(xué)報(bào). 2012(02)
[2]中國海典型生境雙殼類軟體動物多樣性特點(diǎn)[J]. 徐鳳山,張均龍.  生物多樣性. 2011(06)
[3]膠州灣浮游纖毛蟲豐度和生物量的周年變化[J]. 于瑩,張武昌,趙楠,孫曉霞,張翠霞,豐美萍,肖天.  海洋與湖沼. 2011(05)
[4]菲和苯并（b）熒蒽曝露對翡翠貽貝外套膜的氧化脅迫及損傷[J]. 楊濤,陳海剛,蔡文貴,秦潔芳,賈曉平.  南方水產(chǎn)科學(xué). 2011(04)
[5]苯并[a]芘對馬氏珠母貝血淋巴細(xì)胞DNA損傷的研究[J]. 張先勇,刁曉平,楊寶,周海龍,曹佳.  生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào). 2011(Z1)
[6]抑制性消減雜交技術(shù)（SSH）及其在煙草生物學(xué)研究中的應(yīng)用[J]. 李立芹,魯黎明.  中國煙草科學(xué). 2011(03)
[7]打頂煙草根尖組織抑制性消減cDNA文庫的構(gòu)建及其序列分析[J]. 戚元成,馬雷,王菲菲,劉衛(wèi)群.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(07)
[8]刺參（Apostichopus japonicus）高溫脅迫消減cDNA文庫的構(gòu)建與分析[J]. 吉成龍,孫國華,楊建敏,宋志樂,劉相全,王衛(wèi)軍.  海洋與湖沼. 2011(01)
[9]抑制性消減雜交技術(shù)及其在水生動物基因克隆中的應(yīng)用[J]. 單曉楓,孫佳敏,張洪波,王俊義,錢愛東.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2010(23)
[10]翡翠貽貝CYP4基因克隆及其表達(dá)水平分析[J]. 周馳,李純厚,張為民,賈曉平.  熱帶海洋學(xué)報(bào). 2010(04)

博士論文
[1]苯并（α）芘對櫛孔扇貝血細(xì)胞免疫毒性機(jī)制的研究[D]. 劉靜.中國海洋大學(xué) 2009
[2]黃河及河口烴類有機(jī)物的分布特征及源解析[D]. 張嬌.中國海洋大學(xué) 2008
[3]玉米干旱脅迫相關(guān)基因的克隆與分析[D]. 岳桂東.山東大學(xué) 2008
[4]草魚腸道組織消減cDNA文庫的構(gòu)建及免疫相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 蘇建明.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]沙田柚花柱自交不親和相關(guān)基因的克隆與鑒定[D]. 陽晶.廣西師范大學(xué) 2008
[2]近海環(huán)境中有機(jī)污染物對底棲魚體內(nèi)EROD活性的誘導(dǎo)作用研究[D]. 霍傳林.大連理工大學(xué) 2003



本文編號：3076091