中國(guó)海域?qū)拸V，海水中單細(xì)胞藻種資源極其豐富，然而搜集得到活體純培養(yǎng)的藻種卻非常少。從海水中分離新的單胞藻，獲得活體種質(zhì)，是開展實(shí)驗(yàn)研究和開發(fā)利用的基礎(chǔ)，同時(shí)對(duì)保護(hù)海洋生物資源也具有重要意義。作者從中國(guó)北黃海海水中搜集、分離得到了51株單胞藻，探索了一條較為高效的分離純化方法，用分子系統(tǒng)分析結(jié)合形態(tài)特點(diǎn)對(duì)浮游單胞藻做了初步的鑒定，并對(duì)其中的幾種赤潮藻做了詳細(xì)的分子鑒定及培養(yǎng)條件研究，對(duì)它們生長(zhǎng)條件的研究有助于解釋其在自然界大規(guī)模暴發(fā)的機(jī)制。在青島沿海分離到一株罕見海水裸藻，依據(jù)18S rDNA和16S rDNA序列的系統(tǒng)分析結(jié)合形態(tài)特點(diǎn)將其鑒定為Eutreptiella gymnastica，為該藻在中國(guó)的首次正式詳細(xì)記錄。以廣泛使用的光密度值OD₆80作為衡量藻體生物量變化的指標(biāo)，研究了這株藻在不同溫度、光照、鹽度、氮磷濃度下的生長(zhǎng)情況，結(jié)果表明它的最適生長(zhǎng)條件為：溫度20°C,光照強(qiáng)度160μmol/(m²⁺s)；它可耐受10～31的鹽度范圍，淡水中無法存活；磷營(yíng)養(yǎng)是影響其生長(zhǎng)的關(guān)鍵元素，PO3-4濃度高于72μmol/L時(shí)大大促進(jìn)藻的生長(zhǎng)... 

【文章來源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院海洋研究所)山東省

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 綜述
    1.1 海洋微藻的生物學(xué)特征概述
    1.2 微藻的應(yīng)用價(jià)值及生物學(xué)意義
        1.2.1 水產(chǎn)餌料
        1.2.2 營(yíng)養(yǎng)與保健食品
        1.2.3 生物活性物質(zhì)與藥物
        1.2.4 環(huán)境保護(hù)
        1.2.5 生物能源
    1.3 國(guó)內(nèi)外微藻種質(zhì)資源研究現(xiàn)狀
        1.3.1 國(guó)外著名的大型藻種庫
        1.3.2 國(guó)內(nèi)微藻種質(zhì)研究情況
    1.4 從水樣中獲取藻種的常見分離方法及其優(yōu)缺點(diǎn)
        1.4.1 微吸管分離法
        1.4.2 水滴分離法
        1.4.3 稀釋分離法
        1.4.4 平板分離法
    1.5 藻種的鑒定方法及其優(yōu)缺點(diǎn)
        1.5.1 形態(tài)學(xué)鑒定法
        1.5.2 分子生物學(xué)鑒定方法
        1.5.3 生物化學(xué)鑒定方法
    1.6 DNA barcoding（基因條碼技術(shù)）簡(jiǎn)介
        1.6.1 DNA barcoding 的定義
        1.6.2 基因條碼技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)
        1.6.3 能夠作為條碼使用的基因需具備的特征
    1.7 DNA barcoding 在高等動(dòng)植物中和在藻類中的研究現(xiàn)狀
        1.7.1 在動(dòng)物中的研究現(xiàn)狀
        1.7.2 在高等植物中的研究現(xiàn)狀
        1.7.3 在大型海藻中的研究現(xiàn)狀
        1.7.4 在微藻中的研究現(xiàn)狀
    1.8 本論文研究的目的和意義
        1.8.1 微藻種質(zhì)資源的搜集
        1.8.2 微藻的分子鑒定及基因條碼研究
        1.8.3 對(duì)赤潮藻類生長(zhǎng)條件的研究
第二章 用“滴孔法”從海水中獲取分離單胞藻與藻種的分子鑒定
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 水樣采集地點(diǎn)
        2.2.2 水樣的預(yù)處理
        2.2.3 “滴孔法”對(duì)藻種的分離純化
        2.2.4 藻種形態(tài)的顯微觀察
        2.2.5 藻種的分子鑒定
            2.2.5.1 基因組 DNA 的提取
            2.2.5.2 PCR 擴(kuò)增
            2.2.5.3 目的基因回收及測(cè)序
            2.2.5.4 分子系統(tǒng)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 “滴孔法”分離藻種的效果
        2.3.2 已分離得到的藻種及對(duì)它們的鑒定
    2.4 討論
        2.4.1 簡(jiǎn)便高效的單胞藻分離純化方法—“滴孔法”
        2.4.2 分子序列在單胞藻鑒定中的作用
第三章 部分單胞藻的形態(tài)和分子鑒定及生長(zhǎng)條件研究—海水裸藻
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 水樣的采集、種質(zhì)的分離培養(yǎng)
        3.2.2 形態(tài)的顯微觀察
        3.2.3 分子生物學(xué)鑒定
            3.2.3.1 基因組 DNA 的提取
            3.2.3.2 PCR 擴(kuò)增
            3.2.3.3 目的基因回收及測(cè)序
            3.2.3.4 分子系統(tǒng)分析
        3.2.4 培養(yǎng)條件實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 形態(tài)學(xué)特征
        3.3.2 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果--18S rDNA和16S rDNA序列分析
        3.3.3 不同培養(yǎng)條件對(duì)其生長(zhǎng)的影響
    3.4 討論
第四章 部分單胞藻的形態(tài)和分子鑒定及生長(zhǎng)條件研究—桑溝灣赤潮藻
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 水樣的采集、種質(zhì)的分離培養(yǎng)
        4.2.2 形態(tài)的顯微觀察
        4.2.3 分子生物學(xué)鑒定
            4.2.3.1 基因組 DNA 的提取
            4.2.3.2 PCR 擴(kuò)增
            4.2.3.3 目的基因回收及轉(zhuǎn)化
            4.2.3.4 DNA 片段連接到載體、轉(zhuǎn)化質(zhì)粒及藍(lán)白斑篩選
            4.2.3.5 分子系統(tǒng)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 形態(tài)學(xué)特點(diǎn)
        4.3.2 基因序列分析
            4.3.2.1 18S rDNA序列
            4.3.2.2 ITS序列
    4.4 討論
第五章 部分單胞藻的形態(tài)和分子鑒定及生長(zhǎng)條件研究—三種赤潮藻類
    5.1 引言
    5.2 材料和方法
        5.2.1 水樣的采集、種質(zhì)的分離培養(yǎng)
        5.2.2 形態(tài)的顯微觀察
        5.2.3 分子鑒定
            5.2.3.1 基因組 DNA 的提取
            5.2.3.2 PCR 擴(kuò)增
            5.2.3.3 目的基因回收及轉(zhuǎn)化
            5.2.3.4 DNA 片段連接到載體、轉(zhuǎn)化質(zhì)粒及藍(lán)白斑篩選
            5.2.3.5 分子系統(tǒng)分析
        5.2.4 培養(yǎng)條件實(shí)驗(yàn)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 形態(tài)學(xué)特點(diǎn)
            5.3.1.1 Mbccc-Gym-1
            5.3.1.2 HH200907-1
            5.3.1.3 HH200907-2
        5.3.2 分子鑒定：18S rDNA及ITS序列分析
            5.3.2.1 Mbccc-Gym-1
            5.3.2.2 HH200907-1
            5.3.2.3 HH200907-2
        5.3.3 三種藻的生長(zhǎng)條件
680-細(xì)胞密度標(biāo)準(zhǔn)曲線">            5.3.3.1 OD₆80-細(xì)胞密度標(biāo)準(zhǔn)曲線
            5.3.3.2 共生甲藻
            5.3.3.3 錐狀斯氏藻
            5.3.3.4 赤潮異彎藻
    5.4 討論
        5.4.1 對(duì)三種藻的分子生物學(xué)鑒定方法
        5.4.2 培養(yǎng)條件對(duì)三種藻的影響
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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