多年來,黃曲霉毒素（aflatoxin,AFT）對糧食、中藥材、飼料等的污染是導(dǎo)致家禽家畜體質(zhì)肉質(zhì)下降、人類罹患癌癥等健康問題的罪魁禍?zhǔn)�。通過物理、化學(xué)或生物手段有效防治黃曲霉毒素污染是環(huán)境工作者的重要研究內(nèi)容。其中,黃曲霉毒素的微生物防治法是一種既能最大限度的保持農(nóng)作物等產(chǎn)品品質(zhì)、又能減輕對環(huán)境副作用的有效手段。以14株分離自黃海海域沉積物的海洋放線菌為材料,分別在淡水和海水環(huán)境下對其進(jìn)行培養(yǎng),獲得發(fā)酵上清液,通過Tip culture方法,檢測其抑制寄生曲霉菌絲體生長和黃曲霉毒素產(chǎn)生的活性,發(fā)現(xiàn)淡水環(huán)境下培養(yǎng)的菌株MA03和MA01對寄生曲霉菌絲體生長的抑制率和黃曲霉毒素抑制率均超過80%,其乙酸乙酯粗提物抑制寄生曲霉菌絲體生長的IC50值分別為0.275 mg/m L和0.106 mg/m L。此外,本研究還對上述14個菌株的其他生理活性進(jìn)行了檢測。首先,利用MTT方法,檢測上述菌株發(fā)酵上清液的抗腫瘤活性,發(fā)現(xiàn)5個菌株對腫瘤細(xì)胞增殖有抑制效果,其中菌株MA03對3株受試腫瘤細(xì)胞系的抑制率均超過90%,而且,在相同濃度下,其乙酸乙酯粗提物比商品化的抗腫瘤藥物順鉑（DDP）更能高效地... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題背景及研究的目的和意義
    1.2 黃曲霉毒素污染及防治
        1.2.1 黃曲霉毒素的污染現(xiàn)狀
        1.2.2 黃曲霉毒素污染的治理現(xiàn)狀
        1.2.3 黃曲霉毒素的生物防治
    1.3 海洋放線菌資源簡介
        1.3.1 海洋放線菌的特征
        1.3.2 海洋放線菌的開發(fā)現(xiàn)狀
        1.3.3 海洋放線菌次級代謝產(chǎn)物生理活性的多樣性
    1.4 甘薯渣的資源化利用
        1.4.1 甘薯渣的產(chǎn)生與危害
        1.4.2 甘薯渣的主要利用方式
    1.5 微生物次級代謝產(chǎn)物活性成分的分離
        1.5.1 微生物產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物菌株的初篩
        1.5.2 微生物代謝產(chǎn)物活性成分分離技術(shù)
        1.5.3 質(zhì)譜分析技術(shù)及其應(yīng)用
    1.6 發(fā)酵過程優(yōu)化
        1.6.1 培養(yǎng)基成分對微生物代謝的影響
        1.6.2 優(yōu)化方法
    1.7 本文的主要研究內(nèi)容
        1.7.1 主要研究內(nèi)容
        1.7.2 本研究的技術(shù)路線
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 菌種來源
        2.1.2 培養(yǎng)基及相關(guān)溶液的配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器設(shè)備
    2.2 抑黃曲霉毒素活性檢測方法
        2.2.1 海洋放線菌發(fā)酵液的處理
        2.2.2 Tip culture法檢測海洋放線菌抑黃曲霉毒素活性
        2.2.3 平板對峙實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 菌株MA03代謝產(chǎn)物抑制寄生曲霉侵染糧食實(shí)驗(yàn)
    2.3 抗腫瘤活性檢測
        2.3.1 MTT法檢測海洋放線菌抗腫瘤活性
        2.3.2 腫瘤細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)
    2.4 海洋放線菌的分類鑒定及II型PKS基因的擴(kuò)增
        2.4.1 基于 16S r DNA序列的分子生物學(xué)鑒定方法
        2.4.2 海洋放線菌II型PKS基因的擴(kuò)增
        2.4.3 菌株MA03的分類鑒定方法
    2.5 色素的提取及穩(wěn)定性分析
        2.5.1 色素的提取
        2.5.2 色素性質(zhì)分析
    2.6 菌株MA03產(chǎn)抑AFT有效成分的分離
        2.6.1 菌株MA03抑AFT有效成分活性跟蹤
        2.6.2 菌株MA03抑AFT有效成分的分離
    2.7 菌株MA03產(chǎn)抑AFT有效成分發(fā)酵條件優(yōu)化
        2.7.1 以高氏一號培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的單因素實(shí)驗(yàn)
        2.7.2 以甘薯渣為營養(yǎng)基質(zhì)的單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
        2.7.3 響應(yīng)面優(yōu)化及結(jié)果驗(yàn)證
    2.8 菌株MA03發(fā)酵液抗氧化和纖維素酶活性檢測
        2.8.1 菌株MA03發(fā)酵液抗氧化能力檢測
        2.8.2 菌株MA03發(fā)酵液纖維素酶活性測定
第3章 海洋放線菌抑AFT菌株篩選鑒定和PKS II基因擴(kuò)增
    3.1 引言
    3.2 海洋放線菌抑AFT菌株的篩選
        3.2.1 海洋放線菌發(fā)酵上清液的抑AFT活性分析
        3.2.2 海洋放線菌發(fā)酵上清液粗提物的抑AFT能力分析
    3.3 海洋放線菌其他生理活性菌株的篩選
        3.3.1 抗腫瘤活性菌株的篩選
        3.3.2 產(chǎn)色素菌株的篩選及色素性質(zhì)分析
    3.4 抑AFT海洋放線菌菌株的分類鑒定
        3.4.1 菌落的形態(tài)特征
        3.4.2 基于 16S r RNA基因的分子生物學(xué)鑒定
    3.5 抑AFT海洋放線菌菌株的II型PKS基因擴(kuò)增
    3.6 本章小結(jié)
第4章 菌株MA03抑AFT有效成分分離及效能研究
    4.1 引言
    4.2 菌株MA03的分類鑒定
        4.2.1 形態(tài)學(xué)特征觀察
        4.2.2 生理生化特征
        4.2.3 系統(tǒng)發(fā)育分析
    4.3 菌株MA03抑黃曲霉毒素有效成分的分離
        4.3.1 對活性組分的HPLC分析
        4.3.2 對活性組分的質(zhì)譜分析
    4.4 菌株MA03發(fā)酵產(chǎn)物抑制寄生曲霉對糧食侵染的效能分析
        4.4.1 菌株MA03發(fā)酵產(chǎn)物抑制寄生曲霉對花生侵染的效能分析
        4.4.2 菌株MA03發(fā)酵產(chǎn)物抑制寄生曲霉對大米侵染的效能分析
    4.5 菌株MA03發(fā)酵上清液的抗氧化作用研究
        4.5.1 總抗氧化能力的分析
        4.5.2 羥自由基清除能力的檢測
        4.5.3 超氧自由基清除能力的檢測
    4.6 本章小結(jié)
第5章 菌株MA03產(chǎn)抑AFT有效成分發(fā)酵條件優(yōu)化
    5.1 引言
    5.2 菌株MA03以高氏一號培養(yǎng)基為基礎(chǔ)的發(fā)酵條件優(yōu)化
        5.2.1 不同因素對菌株MA03產(chǎn)抑AFT有效成分的影響
        5.2.2 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)對關(guān)鍵影響因素的確定
        5.2.3 爬坡實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.2.4 響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
    5.3 菌株MA03所產(chǎn)纖維素酶活性分析
        5.3.1 菌株MA03所產(chǎn)纖維素酶的底物分析
        5.3.2 菌株MA03所產(chǎn)纖維素酶性質(zhì)研究
    5.4 菌株MA03以甘薯渣為營養(yǎng)基質(zhì)的發(fā)酵條件優(yōu)化
        5.4.1 菌株MA03產(chǎn)抑AFT有效成分的單因素優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
        5.4.2 關(guān)鍵影響因素的PB設(shè)計優(yōu)化
        5.4.3 爬坡實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        5.4.4 響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙水相萃取技術(shù)在生物技術(shù)上的應(yīng)用[J]. 單佳莉,黃幫裕,麥霖霞.  廣東化工. 2014(16)
[2]離子交換法的發(fā)展趨勢及應(yīng)用[J]. 李孟璐,胡書紅,崔躍男.  廣東化工. 2014(14)
[3]海洋放線菌BM-2菌株抗真菌活性物質(zhì)的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定[J]. 馬桂珍,吳少杰,付泓潤,暴增海,王淑芳,葛平華.  中國生物防治學(xué)報. 2014(03)
[4]新疆鹽環(huán)境棉花黃萎菌拮抗放線菌的篩選及菌株TRM42561的防效測定和鑒定[J]. 柳成賓,萬傳星,賈曉宇,張飛,徐彪,范瑛閣,張利莉.  中國生物防治學(xué)報. 2014(03)
[5]海洋鏈霉菌7-145中洋橄欖葉素衍生物的分離鑒定[J]. 吳春彥,譚億,甘茂羅,蒙建州,關(guān)艷,周紅霞,戴劍漉,王以光,尚小雅,楊兆勇,肖春玲.  中國抗生素雜志. 2014(03)
[6]色譜分離技術(shù)應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 萬燕平.  價值工程. 2014(07)
[7]四株海洋放線菌抗氧化活性初篩與微囊化包埋研究[J]. 傅玉鴻,陳鋼,姚香草,韋啟球,溫露.  亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥. 2014(04)
[8]響應(yīng)面法優(yōu)化嗜酸放線菌701產(chǎn)纖溶酶液體發(fā)酵培養(yǎng)條件[J]. 蔡尤佳,劉曉蘭,鄭喜群.  食品研究與開發(fā). 2013(19)
[9]篩選鑒定一株產(chǎn)生抑菌活性物質(zhì)的海洋放線菌[J]. 伍國梁,李林,陳豪,錢冬萌,李榮貴,王斌.  生物技術(shù)通訊. 2013(04)
[10]不同方法提取甘薯渣中果膠的研究[J]. 田亞紅,劉輝.  食品工業(yè). 2013(07)

碩士論文
[1]重組α-葡萄糖苷酶轉(zhuǎn)化廢棄薯渣生產(chǎn)低聚異麥芽糖的研究[D]. 童星.江南大學(xué) 2009
[2]固態(tài)發(fā)酵甘薯渣獲取膳食纖維工藝及設(shè)備研究[D]. 劉平.華中科技大學(xué) 2008



本文編號：3009498