發(fā)布時間：2020-12-21 10:59

　　有機磷農(nóng)藥的大量使用在消滅害蟲確保農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的同時,環(huán)境中殘留的農(nóng)藥給人類健康帶來許多危害�？焖�、有效的清除環(huán)境中的農(nóng)藥殘留已成為目前研究的熱點。從污染環(huán)境中分離篩選高效降解菌,利用微生物對殘留農(nóng)藥進行生物降解,是修復農(nóng)藥污染環(huán)境的重要手段之一。本研究從活性污泥中分離獲得一株毒死蜱高效降解菌YC-YH1,該菌株能夠利用毒死蜱為唯一磷源生長。通過顯微鏡和電鏡掃描觀察確定菌株YC-YH1的形態(tài)特征、結合Biolog微生物鑒定系統(tǒng)和16S r RNA基因序列分子進化分析,鑒定菌株YC-YH1為施氏假單胞菌（Pseudomonas stutzeri）。利用響應面法研究菌株YC-YH1的最適降解條件,結果表明:菌株YC-YH1的最適降解條件為培養(yǎng)溫度32℃、培養(yǎng)基p H 7.3,菌種的初始接種量12.0 mg/L,在優(yōu)化條件下培養(yǎng)4天,可將100 mg/L毒死蜱完全降解。在發(fā)酵條件下,菌株YC-YH1可耐受并降解高達400 mg/L的毒死蜱。降解底物譜分析發(fā)現(xiàn),YC-YH1對有機磷農(nóng)藥、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥、多環(huán)芳烴化合物具有一定的降解能力。運用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術檢測菌株YC-YH1在無磷培養(yǎng)... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 有機磷農(nóng)藥簡介
        1.1.1 有機磷農(nóng)藥的歷史
        1.1.2 有機磷農(nóng)藥的化學和毒理學特性
        1.1.3 有機磷農(nóng)藥的污染
    1.2 農(nóng)藥污染的生物修復
        1.2.1 生物修復簡介
        1.2.2 有機磷農(nóng)藥降解菌
        1.2.3 有機磷農(nóng)藥降解酶
        1.2.4 有機磷降解基因的特性
        1.2.5 毒死蜱的微生物降解
    1.3 微生物基因組研究
        1.3.1 基因組及基因組學簡介
        1.3.2 微生物基因組分析
    1.4 微生物蛋白質(zhì)組研究
        1.4.1 蛋白質(zhì)組及蛋白質(zhì)組學簡介
        1.4.2 蛋白質(zhì)組學的研究策略和技術路線
        1.4.3 雙向差異凝膠電泳技術（2D-DIGE）
    1.5 研究目的和意義
第二章 有機磷農(nóng)藥降解菌的分離與鑒定
    2.1 實驗材料
        2.1.1 環(huán)境樣品
        2.1.2 主要試劑及菌株、載體
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基
        2.1.5 溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 有機磷農(nóng)藥降解菌的富集及分離
        2.2.2 有機磷農(nóng)藥降解菌的鑒定
        2.2.3 有機磷農(nóng)藥降解菌的系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.2.4 降解菌的生物表面活性劑檢測
        2.2.5 降解菌中質(zhì)粒的提取
    2.3 結果與分析
        2.3.1 降解菌的分離與篩選
        2.3.2 毒死蜱的標準曲線
        2.3.3 菌株YC-YH1的形態(tài)學特征
        2.3.4 菌株YC-YH1的生理生化特性
        2.3.5 菌株YC-YH1的抗生素抗性特征
        2.3.6 菌株YC-YH1的Biolog鑒定
        2.3.7 菌株YC-YH1的 16S r RNA基因系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.3.8 菌株YC-YH1的生物表面活性劑檢測
        2.3.9 菌株YC-YH1的質(zhì)粒檢測
    2.4 討論
第三章 菌株YC-YH1的降解特性及代謝產(chǎn)物
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗試劑和儀器
        3.1.2 相關溶液的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 菌株YC-YH1降解毒死蜱條件的優(yōu)化
        3.2.2 菌株YC-YH1在液體培養(yǎng)基中對毒死蜱的降解
        3.2.3 菌株YC-YH1在土壤中對毒死蜱的降解
        3.2.4 菌株YC-YH1降解毒死蜱的發(fā)酵實驗
        3.2.5 菌株YC-YH1降解毒死蜱代謝產(chǎn)物的檢測
        3.2.6 菌株YC-YH1的底物譜分析
        3.2.7 菌株YC-YH1生物表面活性劑的提取與檢測
    3.3 結果與分析
        3.3.1 菌株YC-YH1降解毒死蜱條件的優(yōu)化
        3.3.2 菌株YC-YH1在水體和土壤中對毒死蜱的降解
        3.3.3 菌株YC-YH1對毒死蜱的發(fā)酵實驗
        3.3.4 菌株YC-YH1降解毒死蜱代謝產(chǎn)物的檢測
        3.3.5 菌株YC-YH1的底物譜
        3.3.6 菌株YC-YH1生物表面活性劑的檢測
    3.4 討論
第四章 菌株YC-YH1基因組測序及分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 測序材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
        4.1.4 溶液的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 細菌基因組DNA提取
        4.2.2 測序流程
        4.2.3 基因組信息分析流程
    4.3 結果與分析
        4.3.1 基因組DNA的提取
        4.3.2 測序結果統(tǒng)計
        4.3.3 基因組注釋分析
        4.3.4 比較基因組學分析
        4.3.5 高級分析
    4.4 討論
第五章 菌株YC-YH1的蛋白質(zhì)組學研究
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗試劑
        5.1.2 實驗儀器
        5.1.3 相關溶液的配制
    5.2 實驗方法
        5.2.1 菌株處理
        5.2.2 細菌總蛋白的提取
        5.2.3 蛋白質(zhì)濃度的測定
        5.2.4 雙向電泳流程
        5.2.5 熒光標記蛋白
        5.2.6 熒光差異雙向電泳
        5.2.7 蛋白質(zhì)組差異點的質(zhì)譜鑒定
        5.2.8 菌株總RNA的提取及反轉錄
        5.2.9 關鍵基因的熒光定量驗證
    5.3 結果與分析
        5.3.1 雙向電泳條件的優(yōu)化
        5.3.2 菌株YC-YH1的差異蛋白質(zhì)組分析
        5.3.3 關鍵基因的熒光定量驗證
    5.4 討論
第六章 有機磷降解調(diào)控蛋白的篩選
    6.1 實驗材料
        6.1.1 實驗試劑
        6.1.2 實驗儀器
        6.1.3 溶液配制
    6.2 實驗方法
        6.2.1 調(diào)控蛋白基因的克隆
        6.2.2 調(diào)控蛋白基因的表達和純化
        6.2.3 調(diào)控蛋白的篩選
    6.3 結果與分析
        6.3.1 調(diào)控蛋白的表達與純化
        6.3.2 調(diào)控蛋白的篩選
        6.3.3 調(diào)控蛋白的驗證
    6.4 討論
第七章 全文結論
    7.1 研究結果
    7.2 創(chuàng)新點
    7.3 研究展望
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]nr數(shù)據(jù)庫分析及其本地化[J]. 鄧泱泱,荔建琦,吳松鋒,朱云平,陳耀文,賀福初.  計算機工程. 2006(05)

博士論文
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[2]降解毒死蜱的副球菌TRP菌株基因組測序、cpd基因的克隆及功能驗證[D]. 李康.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012
[3]擬除蟲菊酯降解酶基因的克隆及酶學性質(zhì)研究[D]. 翟逸.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012

碩士論文
[1]毒死蜱降解菌的分離、鑒定及其降解特性[D]. 史延華.中國農(nóng)業(yè)科學院 2011
[2]生物表面活性劑對假單胞菌GP3A降解芘的性能影響及機理研究[D]. 姜萍萍.華南理工大學 2011
[3]有機磷農(nóng)藥殘留高效降解微生物的篩選、鑒定及降解機理研究[D]. 徐剛明.山東農(nóng)業(yè)大學 2007



本文編號：2929713