發(fā)布時間：2020-07-11 15:17

【摘要】：本文根據(jù)目前我國近海多環(huán)芳烴污染現(xiàn)狀以及漁用抗生素的使用情況，以我國養(yǎng)殖的甲殼類主要品種凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）為研究對象，以毒性最強的多環(huán)芳烴（PAHs）——苯并（a）芘（BaP）作為多環(huán)芳烴的代表，以養(yǎng)殖過程中常用的抗生素——氟苯尼考（FLR）作為漁用抗生素的代表，研究了PAHs（BaP）在凡納濱對蝦鰓和肝胰腺中的含量分布，測定了這兩種組織中PAHs的解毒代謝酶和相關(guān)核受體調(diào)節(jié)基因的表達，大分子損傷，并且初步研究了BaP對凡納濱對蝦免疫和抗氧化系統(tǒng)的影響；研究了漁用抗生素（FLR）在凡納濱對蝦鰓、肝胰腺和肌肉中的組織分布及消除情況，測定了肝胰腺中FLR的代謝酶和相關(guān)基因的表達，氧化損傷效應(yīng)，并且初步研究了FLR對凡納濱對蝦鰓絲和肝胰腺免疫和抗氧化系統(tǒng)的影響；得到了如下的結(jié)果： 1.多環(huán)芳烴（BaP）在凡納濱對蝦體內(nèi)蓄積毒性效應(yīng)的研究 本研究采用實驗室試驗方法，將凡納濱對蝦暴露于0.03μg/L，0.3μg/L，3μg/LBaP21d，分別于0，1d，3d，6d，10d，15d，21d取樣，測定了BaP在凡納濱對蝦鰓絲和肝胰腺中的累積量，并比較分析了BaP對凡納濱對蝦兩種器官累積的時間劑量效應(yīng)。0.03μg/L BaP處理組鰓和肝胰腺中BaP的累積量在3d時已顯著高于對照組，6d－10d BaP的累積量趨于穩(wěn)定。0.3和3μg/L BaP處理組鰓絲中BaP的累積量在1d時已顯著高于對照組，并且在3d－10d內(nèi)隨時間而逐漸增高，10d時累積量顯著高于第3d的累積量，10d－21d BaP的累積量趨于穩(wěn)定。兩種器官對于BaP的累積量都隨著海水中BaP濃度的增高而顯著升高。并且肝胰腺中BaP的累積大于鰓。BaP可以較快的從水環(huán)境中吸收到凡納濱對蝦體內(nèi)。參考中華人民共和國國家標準GB7104-84，食品中B[a]P含量應(yīng)小于5μg/kg。在本實驗中各BaP處理組凡納濱對蝦鰓絲和肝胰腺累積量均已超過限制標準。 為了研究多環(huán)芳烴在凡納濱對蝦體內(nèi)的解毒代謝過程，測定了以下幾種解毒代謝酶及相關(guān)基因（i） I相解毒代謝酶（AHH，EROD，EH）和II相解毒代謝酶（GST，SULT，UGT）；(ii）解毒代謝相關(guān)基因（AhR，CYP1A1，GST，SULT）。BaP脅迫（0.03，0.3，3μg/L）后1-，3-，6-，10-，15-，21d取樣。除0.03μg/L處理組所有的解毒酶活性以劑量依賴的方式增加。利用實時RT-PCR測定基因的轉(zhuǎn)錄情況，結(jié)果表明，在染毒的6d內(nèi)，AhR，CYP1A1，GST，SULTmRNA的表達具有明顯的時間-劑量效應(yīng)，這表明這些基因可能是BaP的潛在目標破壞解毒系統(tǒng)系統(tǒng)。從所有的基因mRNA表達的一致性來看，甲殼動物中可能存在類似于脊椎動物AhR介導的PAHs解毒代謝途徑。此外，肝胰腺酶活性要高于鰓。這些結(jié)果不僅可以為BaP在甲殼動物體內(nèi)的解毒代謝提供信息，而且可以為養(yǎng)殖環(huán)境的監(jiān)測提供科學數(shù)據(jù)。 采用實驗室試驗將凡納濱對蝦暴露于0.03，0.3，3μg/L BaP21d，分別于0，1d，3d，6d，10d，15d，21d取樣，研究了BaP對凡納濱對蝦鰓和肝胰腺的大分子損傷效應(yīng)（DNA損傷，脂質(zhì)過氧化，蛋白羰基化）。結(jié)果表明兩種組織中DNA損傷程度與染毒濃度呈負相關(guān)，MDA含量和PC含量與染毒濃度呈正相關(guān)。F值3d時高濃度處理組表現(xiàn)出極顯著下降，然后逐漸趨于穩(wěn)定。0.3,3μg/L BaP處理組鰓中MDA含量和PC含量6d時顯著上升（P＜0.05），10d時略降，實驗結(jié)束時仍顯著高于對照組。肝胰腺中MDA含量和PC含量最高值出現(xiàn)在第6d。 采用實驗室試驗將凡納濱對蝦暴露于0.03μg/L，0.3μg/L，3μg/L BaP21d，分別于0，1d，3d，6d，10d，15d，21d取樣，研究了BaP對凡納濱對蝦免疫指標（THC, pro-PO, PO, α2-M,吞噬活力，抗菌和溶菌活力）和抗氧化指標（T-AOC, SOD, GSH, GSH/GSSG）的影響，結(jié)果表明BaP對各個免疫指標和抗氧化指標除SOD外有抑制作用，其中THC，酚氧化酶活力，吞噬活力，溶菌活力和GSH含量在BaP脅迫下具有明顯的時間劑量效應(yīng)，可以作為評估養(yǎng)殖環(huán)境BaP污染的敏感指標。 2.漁用抗生素（氟苯尼考）凡納濱對蝦體內(nèi)蓄積毒性效應(yīng)的研究 采用實驗室實驗連續(xù)投喂凡納濱對蝦100mg kg1and200mg kg1體質(zhì)量氟苯尼考10d，于投喂?jié)O藥的第3d，6d以及停止投喂抗生素的第1d，3d，6d，10d取樣，氟苯尼考在凡納濱對蝦不同組織累積和消除表明：凡納濱對蝦連續(xù)6d口服氟苯尼考后，藥物濃度在各個組織逐漸升高，于6d時達到最高值，藥物在各組織中的分布為肝胰腺鰓肌肉，藥物在肝胰腺中殘留最多。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，藥物濃度在各個組織迅速下降。 為了研究漁藥抗生素在凡納濱對蝦體內(nèi)的代謝過程，測定了以下幾種代謝酶及相關(guān)基因（i）I相解毒代謝酶（EROD）和II相解毒代謝酶（GST）；(ii）解毒代謝相關(guān)基因（CYP1A1, CYP3, CYP4, GST）。結(jié)果表明，對凡納濱對蝦肝胰腺EROD活力、CYP1A1、CYP3、CYP4mRNA表達、GST活力和GST mRNA表達影響顯著（P0.05），而對照組無明顯變化。在投喂?jié)O藥期間（0-6d），各處理組EROD活力、CYP1A1、CYP3mRNA表達、GST活力和GST mRNA表達均被顯著誘導，于6d時達到最大值，CYP4mRNA表達呈逐漸下降趨勢，6d時達到最小值。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，各處理組肝胰腺EROD活力、CYP1A1、CYP3mRNA表達、GST活力和GST mRNA表達逐漸下降， CYP4mRNA表達則逐漸升高，于停止投藥3d時恢復至對照組水平。 FLR對凡納濱對蝦健康生理影響的結(jié)果表明：在投喂?jié)O藥期間（0-6d），各處理組總血細胞數(shù)量、血細胞酚氧化酶原活力、血漿酚氧化酶活力、血漿α2巨球蛋白、血細胞吞噬活力、血漿溶菌活力和血漿抗菌活力6d內(nèi)呈峰值變化，均于6d達到最小值和最大值（P0.05）。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，各免疫指標恢復至對照組水平。氟苯尼考和諾氟沙星對凡納濱對蝦血淋巴總抗氧化能力（T-AOC）、SOD活力、GSH/GSSG產(chǎn)生顯著影響（P0.05），而對照組無明顯變化。在投喂?jié)O藥期間（0-6d），各處理組T-AOC、GSH/GSSG呈逐漸下降趨勢，于6d時達到最小值，SOD活力被顯著誘導，6d時達到峰值。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，各處理組T-AOC、SOD活力和GSH/GSSG于停止投藥3d時恢復至對照組水平。 FLR對凡納濱對蝦大分子損傷效應(yīng)的結(jié)果表明：在投喂藥餌期間，F(xiàn)值3d時各處理組表現(xiàn)出顯著下降，停止投喂藥餌后，低濃度組逐漸恢復正常，而高濃度F值處于較低的水平，與對照組差異顯著。在投喂藥餌期間，肝胰腺中MDA含量顯著上升（P＜0.05），于6d時達到最高值。肝胰腺中羰基化蛋白含量在投喂藥餌6d內(nèi)逐漸升高，停止投喂藥餌后直至實驗結(jié)束又逐漸下降。
【學位授予單位】：中國海洋大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：X174

【參考文獻】

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本文編號：2750579