發(fā)布時(shí)間：2020-07-11 15:17

【摘要】：本文根據(jù)目前我國(guó)近海多環(huán)芳烴污染現(xiàn)狀以及漁用抗生素的使用情況，以我國(guó)養(yǎng)殖的甲殼類主要品種凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）為研究對(duì)象，以毒性最強(qiáng)的多環(huán)芳烴（PAHs）——苯并（a）芘（BaP）作為多環(huán)芳烴的代表，以養(yǎng)殖過(guò)程中常用的抗生素——氟苯尼考（FLR）作為漁用抗生素的代表，研究了PAHs（BaP）在凡納濱對(duì)蝦鰓和肝胰腺中的含量分布，測(cè)定了這兩種組織中PAHs的解毒代謝酶和相關(guān)核受體調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，大分子損傷，并且初步研究了BaP對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫和抗氧化系統(tǒng)的影響；研究了漁用抗生素（FLR）在凡納濱對(duì)蝦鰓、肝胰腺和肌肉中的組織分布及消除情況，測(cè)定了肝胰腺中FLR的代謝酶和相關(guān)基因的表達(dá)，氧化損傷效應(yīng)，并且初步研究了FLR對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓絲和肝胰腺免疫和抗氧化系統(tǒng)的影響；得到了如下的結(jié)果： 1.多環(huán)芳烴（BaP）在凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)蓄積毒性效應(yīng)的研究 本研究采用實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)方法，將凡納濱對(duì)蝦暴露于0.03μg/L，0.3μg/L，3μg/LBaP21d，分別于0，1d，3d，6d，10d，15d，21d取樣，測(cè)定了BaP在凡納濱對(duì)蝦鰓絲和肝胰腺中的累積量，并比較分析了BaP對(duì)凡納濱對(duì)蝦兩種器官累積的時(shí)間劑量效應(yīng)。0.03μg/L BaP處理組鰓和肝胰腺中BaP的累積量在3d時(shí)已顯著高于對(duì)照組，6d－10d BaP的累積量趨于穩(wěn)定。0.3和3μg/L BaP處理組鰓絲中BaP的累積量在1d時(shí)已顯著高于對(duì)照組，并且在3d－10d內(nèi)隨時(shí)間而逐漸增高，10d時(shí)累積量顯著高于第3d的累積量，10d－21d BaP的累積量趨于穩(wěn)定。兩種器官對(duì)于BaP的累積量都隨著海水中BaP濃度的增高而顯著升高。并且肝胰腺中BaP的累積大于鰓。BaP可以較快的從水環(huán)境中吸收到凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)。參考中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB7104-84，食品中B[a]P含量應(yīng)小于5μg/kg。在本實(shí)驗(yàn)中各BaP處理組凡納濱對(duì)蝦鰓絲和肝胰腺累積量均已超過(guò)限制標(biāo)準(zhǔn)。 為了研究多環(huán)芳烴在凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)的解毒代謝過(guò)程，測(cè)定了以下幾種解毒代謝酶及相關(guān)基因（i） I相解毒代謝酶（AHH，EROD，EH）和II相解毒代謝酶（GST，SULT，UGT）；(ii）解毒代謝相關(guān)基因（AhR，CYP1A1，GST，SULT）。BaP脅迫（0.03，0.3，3μg/L）后1-，3-，6-，10-，15-，21d取樣。除0.03μg/L處理組所有的解毒酶活性以劑量依賴的方式增加。利用實(shí)時(shí)RT-PCR測(cè)定基因的轉(zhuǎn)錄情況，結(jié)果表明，在染毒的6d內(nèi)，AhR，CYP1A1，GST，SULTmRNA的表達(dá)具有明顯的時(shí)間-劑量效應(yīng)，這表明這些基因可能是BaP的潛在目標(biāo)破壞解毒系統(tǒng)系統(tǒng)。從所有的基因mRNA表達(dá)的一致性來(lái)看，甲殼動(dòng)物中可能存在類似于脊椎動(dòng)物AhR介導(dǎo)的PAHs解毒代謝途徑。此外，肝胰腺酶活性要高于鰓。這些結(jié)果不僅可以為BaP在甲殼動(dòng)物體內(nèi)的解毒代謝提供信息，而且可以為養(yǎng)殖環(huán)境的監(jiān)測(cè)提供科學(xué)數(shù)據(jù)。 采用實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)將凡納濱對(duì)蝦暴露于0.03，0.3，3μg/L BaP21d，分別于0，1d，3d，6d，10d，15d，21d取樣，研究了BaP對(duì)凡納濱對(duì)蝦鰓和肝胰腺的大分子損傷效應(yīng)（DNA損傷，脂質(zhì)過(guò)氧化，蛋白羰基化）。結(jié)果表明兩種組織中DNA損傷程度與染毒濃度呈負(fù)相關(guān)，MDA含量和PC含量與染毒濃度呈正相關(guān)。F值3d時(shí)高濃度處理組表現(xiàn)出極顯著下降，然后逐漸趨于穩(wěn)定。0.3,3μg/L BaP處理組鰓中MDA含量和PC含量6d時(shí)顯著上升（P＜0.05），10d時(shí)略降，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍顯著高于對(duì)照組。肝胰腺中MDA含量和PC含量最高值出現(xiàn)在第6d。 采用實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)將凡納濱對(duì)蝦暴露于0.03μg/L，0.3μg/L，3μg/L BaP21d，分別于0，1d，3d，6d，10d，15d，21d取樣，研究了BaP對(duì)凡納濱對(duì)蝦免疫指標(biāo)（THC, pro-PO, PO, α2-M,吞噬活力，抗菌和溶菌活力）和抗氧化指標(biāo)（T-AOC, SOD, GSH, GSH/GSSG）的影響，結(jié)果表明BaP對(duì)各個(gè)免疫指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)除SOD外有抑制作用，其中THC，酚氧化酶活力，吞噬活力，溶菌活力和GSH含量在BaP脅迫下具有明顯的時(shí)間劑量效應(yīng)，可以作為評(píng)估養(yǎng)殖環(huán)境BaP污染的敏感指標(biāo)。 2.漁用抗生素（氟苯尼考）凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)蓄積毒性效應(yīng)的研究 采用實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)連續(xù)投喂凡納濱對(duì)蝦100mg kg1and200mg kg1體質(zhì)量氟苯尼考10d，于投喂?jié)O藥的第3d，6d以及停止投喂抗生素的第1d，3d，6d，10d取樣，氟苯尼考在凡納濱對(duì)蝦不同組織累積和消除表明：凡納濱對(duì)蝦連續(xù)6d口服氟苯尼考后，藥物濃度在各個(gè)組織逐漸升高，于6d時(shí)達(dá)到最高值，藥物在各組織中的分布為肝胰腺鰓肌肉，藥物在肝胰腺中殘留最多。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，藥物濃度在各個(gè)組織迅速下降。 為了研究漁藥抗生素在凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)的代謝過(guò)程，測(cè)定了以下幾種代謝酶及相關(guān)基因（i）I相解毒代謝酶（EROD）和II相解毒代謝酶（GST）；(ii）解毒代謝相關(guān)基因（CYP1A1, CYP3, CYP4, GST）。結(jié)果表明，對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺EROD活力、CYP1A1、CYP3、CYP4mRNA表達(dá)、GST活力和GST mRNA表達(dá)影響顯著（P0.05），而對(duì)照組無(wú)明顯變化。在投喂?jié)O藥期間（0-6d），各處理組EROD活力、CYP1A1、CYP3mRNA表達(dá)、GST活力和GST mRNA表達(dá)均被顯著誘導(dǎo)，于6d時(shí)達(dá)到最大值，CYP4mRNA表達(dá)呈逐漸下降趨勢(shì)，6d時(shí)達(dá)到最小值。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，各處理組肝胰腺EROD活力、CYP1A1、CYP3mRNA表達(dá)、GST活力和GST mRNA表達(dá)逐漸下降， CYP4mRNA表達(dá)則逐漸升高，于停止投藥3d時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平。 FLR對(duì)凡納濱對(duì)蝦健康生理影響的結(jié)果表明：在投喂?jié)O藥期間（0-6d），各處理組總血細(xì)胞數(shù)量、血細(xì)胞酚氧化酶原活力、血漿酚氧化酶活力、血漿α2巨球蛋白、血細(xì)胞吞噬活力、血漿溶菌活力和血漿抗菌活力6d內(nèi)呈峰值變化，均于6d達(dá)到最小值和最大值（P0.05）。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，各免疫指標(biāo)恢復(fù)至對(duì)照組水平。氟苯尼考和諾氟沙星對(duì)凡納濱對(duì)蝦血淋巴總抗氧化能力（T-AOC）、SOD活力、GSH/GSSG產(chǎn)生顯著影響（P0.05），而對(duì)照組無(wú)明顯變化。在投喂?jié)O藥期間（0-6d），各處理組T-AOC、GSH/GSSG呈逐漸下降趨勢(shì)，于6d時(shí)達(dá)到最小值，SOD活力被顯著誘導(dǎo)，6d時(shí)達(dá)到峰值。在停止投喂?jié)O藥（7-16d）階段，各處理組T-AOC、SOD活力和GSH/GSSG于停止投藥3d時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平。 FLR對(duì)凡納濱對(duì)蝦大分子損傷效應(yīng)的結(jié)果表明：在投喂藥餌期間，F(xiàn)值3d時(shí)各處理組表現(xiàn)出顯著下降，停止投喂藥餌后，低濃度組逐漸恢復(fù)正常，而高濃度F值處于較低的水平，與對(duì)照組差異顯著。在投喂藥餌期間，肝胰腺中MDA含量顯著上升（P＜0.05），于6d時(shí)達(dá)到最高值。肝胰腺中羰基化蛋白含量在投喂藥餌6d內(nèi)逐漸升高，停止投喂藥餌后直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束又逐漸下降。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：X174

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2750579