【摘要】：塑化劑、有機(jī)氯農(nóng)藥和多環(huán)芳烴雖然具有不同的物理化學(xué)性質(zhì),但都是在環(huán)境中廣泛存在的,對(duì)人類、其他生命體、財(cái)產(chǎn)和環(huán)境安全產(chǎn)生危害的一類有機(jī)污染物。在目前的研究中,主要使用人體生物個(gè)體監(jiān)測(cè)的方法對(duì)環(huán)境中有害物質(zhì)的內(nèi)暴露濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)。孕期胎兒是一類極為敏感的暴露對(duì)象,巴克假說提出在孕期暴露引起的影響可能導(dǎo)致出生后甚至成年期的負(fù)面健康效應(yīng),目前有部分研究報(bào)道了外源性有害物質(zhì)進(jìn)入臍血循環(huán)的現(xiàn)象,而對(duì)其如何通過胎盤的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究仍十分缺乏。有害物質(zhì)進(jìn)入胎血循環(huán)后,其中的內(nèi)分泌干擾物質(zhì)可能影響胎兒的下丘腦-垂體-性腺軸,進(jìn)而影響胎兒發(fā)育過程中的內(nèi)分泌水平,調(diào)節(jié)內(nèi)源性激素的分泌量。因此,研究有害物質(zhì)的暴露水平,建立有效的人體生物個(gè)體監(jiān)測(cè)方法;研究胎兒暴露于有害物質(zhì)的水平和暴露機(jī)制,并進(jìn)一步研究有害物質(zhì)對(duì)胎兒直接產(chǎn)生的健康效應(yīng),對(duì)于環(huán)境中的有害物質(zhì)健康風(fēng)險(xiǎn)研究具有重要的科學(xué)意義和現(xiàn)實(shí)意義。本文主要研究結(jié)果如下:(1)建立了一種以人毛發(fā)為生物基質(zhì)的準(zhǔn)確定量檢測(cè)塑化劑生物標(biāo)志物的人體生物個(gè)體監(jiān)測(cè)方法,并進(jìn)行了小試實(shí)驗(yàn)。該方法符合歐洲藥物管理局的方法驗(yàn)證指針要求的精密度和準(zhǔn)確度。能夠?qū)δ繕?biāo)待測(cè)的4種替代型塑化劑的11種生物標(biāo)志物中的10種進(jìn)行準(zhǔn)確定量檢測(cè)。個(gè)體監(jiān)測(cè)小試實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與更親水的次級(jí)代謝物比較,較疏水性的初級(jí)單酯代謝物較易被檢出。表明頭發(fā)是一種具有較好的保留、儲(chǔ)存血液中的替代型塑化劑代謝物能力的基質(zhì),可以作為一種用于人體替代型塑化劑暴露評(píng)估的生物基質(zhì)。它在研究弱勢(shì)或難以取樣的人群(如新生兒和幼兒)暴露時(shí)具有較大的應(yīng)用價(jià)值。(2)擴(kuò)展及驗(yàn)證毛發(fā)中定量塑化劑的生物監(jiān)測(cè)方法,使其可以同時(shí)測(cè)定鄰苯二甲酸酯類塑化劑和替代型塑化劑的生物標(biāo)志物濃度,使用ICU院內(nèi)塑化劑暴露的患者頭發(fā)就進(jìn)行分段監(jiān)測(cè),發(fā)現(xiàn)暴露組患者頭發(fā)中生物標(biāo)志物濃度的變化隨暴露時(shí)間的增加而增加。其中鄰苯二甲酸單乙酯(1MEP,monoethyl Phthalate,),單(2-乙基已基)鄰苯二甲酸酯旨(MEHP,Mono(2-Ethylhexyl)Phthalate)和對(duì)苯二甲酸單(2-乙基已基)酯(MEHTP,Mono(2-Ethylhexyl)Terephthalate)可能與院內(nèi)暴露塑化劑有關(guān),其他塑化劑生物標(biāo)志物濃度可能與背景暴露有關(guān)。(3)在湖北省武漢市招募并選取了 79對(duì)母嬰的母靜脈血-臍血-胎盤樣品組,測(cè)定了成組樣品中典型有機(jī)氯農(nóng)藥的濃度、手性對(duì)映體分?jǐn)?shù),計(jì)算有機(jī)氯農(nóng)藥六六六同系物和滴滴涕及其代謝產(chǎn)物的跨胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)效率;討論參與者個(gè)人因素及社會(huì)學(xué)因素對(duì)暴露狀況和轉(zhuǎn)運(yùn)效率的影響。發(fā)現(xiàn)有機(jī)氯農(nóng)藥在三種生物基質(zhì)中暴露水平脂重濃度母靜脈血臍血胎盤,其中β-HCH和p,p'-DDE為主要存在的污染物種類。研究中發(fā)現(xiàn)胎次和污染物濃度呈顯著負(fù)相關(guān);年齡等其他因素亦與污染物在體內(nèi)暴露狀況相關(guān),但相關(guān)并不普遍存在。研究中發(fā)現(xiàn)手性污染物α-HCH,o,p'-DDD和o,p'-DDT在三種生物樣品中均呈非外消旋。其中EFα-HCH0.5,EFo,p'-DDD0.5,EFo,p'-DDT0.5。有機(jī)氯農(nóng)藥六六六和滴滴涕呈現(xiàn)不同的跨胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)特征,六六六的Rcm1,而滴滴涕的Rcm≈1,不同污染物轉(zhuǎn)運(yùn)效率上的差異可能與其物理化學(xué)性質(zhì)或具有不同的跨胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制有關(guān)。(4)結(jié)合六六六與滴滴涕跨胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)效率不同的結(jié)果上,應(yīng)用BeWo細(xì)胞構(gòu)建體外胎盤絨毛膜上皮細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)對(duì)典型有機(jī)氯農(nóng)藥的跨胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)六六六和滴滴涕在暴露實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至180分鐘時(shí)達(dá)到濃度平衡,六六六表現(xiàn)出較滴滴涕高的AP-BL方向的表觀轉(zhuǎn)運(yùn)效率;BL-AP方向表現(xiàn)出較AP-BL方向高的轉(zhuǎn)運(yùn)效率;PDRDDTPDRHCH,代表HCH較難通過胎盤絨毛膜上皮細(xì)胞膜,與實(shí)際樣品實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。轉(zhuǎn)運(yùn)抑制實(shí)驗(yàn)觀察到ATP-結(jié)合盒蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白族抑制劑和代謝抑制劑能夠顯著的降低OCP跨Be Wo細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)效率,證實(shí)OCP的跨胎盤轉(zhuǎn)運(yùn)過程是多種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與的主動(dòng)運(yùn)輸及親脂性物質(zhì)跨磷脂雙分子層被動(dòng)擴(kuò)散運(yùn)輸?shù)慕Y(jié)果。(5)使用人體生物個(gè)體監(jiān)測(cè)方法測(cè)定了 109對(duì)從舟山市嵊泗群島招募的母嬰對(duì)臍帶血樣品中的多環(huán)芳烴類污染物的體內(nèi)暴露濃度,配合酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)定量性激素濃度水平,并研究?jī)烧咧g的相關(guān)性和可能影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)16種PAHs總濃度為164(IQR93.6-267)ng g-1脂重,其中主要成分為L(zhǎng)-PAHs。膳食攝入途徑是研究人群的主要暴露途徑。臍帶血中16種PAHs的總濃度及H-PAHs濃度與潛在影響因素未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性;而L-PAHs與胎兒性別、胎次、孕期體重增加、流產(chǎn)次數(shù)及妊娠期具有顯著相關(guān);未發(fā)現(xiàn)潛在因素與性激素水平具有顯著相關(guān)性。多環(huán)芳烴暴露負(fù)調(diào)節(jié)臍血中E2和AMH水平,上調(diào)FSH水平。這種調(diào)節(jié)可能與孕期污染物暴露對(duì)胎兒HPG軸的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。
【圖文】：

應(yīng)監(jiān)測(cè)（ＭＲＭ）的離子對(duì)和質(zhì)譜儀器參數(shù)。逡逑數(shù)據(jù)采集使用動(dòng)態(tài)多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ｄＭＲＭ）模式進(jìn)行。色譜程序?yàn)椋玻捣昼�。該逡逑色譜方法能將具有相似的結(jié)構(gòu)和相同的ＭＲＭ離子對(duì)的ＤＥＨＴＰ的代謝物逡逑（ＭＥＨＴＰ和ＯＨ－ＭＥＨＴＰ）與ＤＥＨＰ的代謝物（ＭＥＨＰ和ＯＨ－ＭＥＨＰ）基線分離（如圖逡逑２．１嚴(yán)６］。然而，該方法不能分離Ｄ１ＤＰ和ＤＰＨＰ的代謝物。因此，ＤＰＨＰ代謝物逡逑的結(jié)果應(yīng)解釋為ＤＩＤＰ和ＤＰＨＰ的代謝物濃度的總和［３２］。色譜和質(zhì)譜設(shè)置和條件逡逑見表２．２和２．３。逡逑本實(shí)驗(yàn)中使用范圍從０．１邋ｎｇ至７５邋ｎｇ的８點(diǎn)校準(zhǔn)曲線進(jìn)行目標(biāo)生物標(biāo)志物的逡逑定量。校準(zhǔn)曲線的測(cè)定系數(shù)均大于０．９９。實(shí)驗(yàn)中使用的信噪比（Ｓ／Ｎ）由Ａｇｉｌｅｎｔ逡逑ＭａｓｓｈｉｍｔｅｒＱＱＱ定量軟件計(jì)算，，該軟件使用目標(biāo)分析物的峰面積與在自動(dòng)選擇逡逑的時(shí)間窗口（峰值前６０秒或峰值后３０秒）作為基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差或均方根計(jì)算。逡逑＊１０邋？逡逑３－７５＇邋＇一＂邐．邋．．邐逡逑

ＰＢＳ樣品同樣處理，作為對(duì)照組。結(jié)果表明，弱酸堿變性處理均顯著降低了邋ＡＰ逡逑代謝物的回收率。目標(biāo)分析物的回收率隨著酸（１１％－４５％）和堿性（１１％－８５％）變性逡逑而降低（圖２．２）。逡逑基于實(shí)驗(yàn)結(jié)果，決定在萃取之前不適用毛發(fā)樣品消化步驟以避免降解目標(biāo)生逡逑物標(biāo)志物回收率。逡逑２８逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R99;X592


本文編號(hào)：2648349