發(fā)布時(shí)間：2020-04-14 14:40

【摘要】：葡萄果實(shí)味道鮮美,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,可鮮食,也可制成葡萄酒、葡萄干、葡萄汁等加工制品,備受公眾喜歡。近年來(lái),葡萄的種植面積和產(chǎn)量也在明顯的增加,中國(guó)已成為葡萄和葡萄酒生產(chǎn)及消費(fèi)大國(guó)。由于葡萄糖分大,且不易清洗,適合微生物的附著與生長(zhǎng),這就將導(dǎo)致在種植生長(zhǎng)、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程中真菌病害的發(fā)生,一些病原真菌不僅能導(dǎo)致果實(shí)腐爛,還會(huì)產(chǎn)生對(duì)人體有危害作用的真菌毒素。為了防治真菌病害的發(fā)生,得到優(yōu)質(zhì)的葡萄,在整個(gè)栽培及儲(chǔ)運(yùn)階段,殺菌劑的使用必不可少。這就導(dǎo)致生物性危害(病原菌及真菌毒素)和化學(xué)性危害(殺菌劑)的混合污染。本論文選取葡萄為研究對(duì)象,評(píng)價(jià)我國(guó)北方主產(chǎn)區(qū)采收期葡萄膳食攝入風(fēng)險(xiǎn),探究葡萄酒加工過(guò)程中多菌靈或VA霉靈對(duì)炭黑曲霉菌生長(zhǎng)及產(chǎn)毒的影響,明晰多菌靈、VA霉靈及赭曲霉毒素A的變化規(guī)律,在轉(zhuǎn)錄組水平上解析典型農(nóng)藥抑制炭黑曲霉產(chǎn)毒的機(jī)理。為葡萄中生物性危害因子及化學(xué)性危害因子的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、加工過(guò)程中的赭曲霉毒素A的防控與消除提供理論依據(jù),為從根源上防控炭黑曲霉產(chǎn)毒提供新思路,主要結(jié)論如下:第一,建立了葡萄、葡萄酒、葡萄干、葡萄汁中赭曲霉毒素A以及13種常用殺菌劑(甲基硫菌靈,腈菌唑,甲霜靈,嘧霉胺,烯酰嗎啉,戊唑醇,苯醚甲環(huán)唑,抑霉唑,三唑酮,吡唑醚菌酯,咪鮮胺,丙環(huán)唑,嘧菌酯)同步檢測(cè)的殘留分析方法,樣品采用乙腈提取,C18凈化,超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè),外標(biāo)法定量,平均回收率在73.7% 117.9%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.1% 20.1%之間,該方法中赭曲霉毒素A的定量限為0.1μg kg~(-1),13種常用殺菌劑的定量限為1μg kg~(-1)�？焖俸�(jiǎn)便、省時(shí)高效,測(cè)定濃度范圍寬泛,靈敏度高,定量準(zhǔn)確,可用于葡萄及其加工制品中赭曲霉毒素A及13種常用的殺菌劑的同步檢測(cè),為后續(xù)樣品檢測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作奠定基礎(chǔ)。第二,對(duì)所采集的829份我國(guó)北方主產(chǎn)區(qū)采收期的葡萄樣品中13種常用殺菌劑進(jìn)行殘留量檢測(cè),結(jié)果表明13種殺菌劑均有不同程度的檢出,鮮食葡萄樣品中,農(nóng)藥多殘留現(xiàn)象較為嚴(yán)重,但殘留水平較低,大多數(shù)屬于痕量級(jí)別。結(jié)合人類平均膳食消費(fèi)數(shù)據(jù)、人群平均體重?cái)?shù)據(jù),基于Monte Carlo數(shù)學(xué)概率模型對(duì)國(guó)內(nèi)葡萄中主要?dú)⒕鷦┑纳攀硵z入風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估,結(jié)果表明,13種常用殺菌劑的慢性膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)都比較低,均為可接受風(fēng)險(xiǎn),急性膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)較高,但都處于可接受水平,其中戊唑醇的急性膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)較高,已經(jīng)達(dá)到91.37%,在農(nóng)藥使用及日常膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)方面都應(yīng)引起廣泛關(guān)注。本研究可為中國(guó)葡萄質(zhì)量安全監(jiān)管以及今后系統(tǒng)開(kāi)展農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工作提供參考。第三,評(píng)估葡萄中常用的殺菌劑對(duì)炭黑曲霉菌落生長(zhǎng)及赭曲霉毒素A產(chǎn)生的影響,采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定各殺菌劑對(duì)炭黑曲霉菌落生長(zhǎng)的抑制效果,同時(shí)對(duì)其產(chǎn)生的赭曲霉毒素A進(jìn)行提取測(cè)定,比較不同殺菌劑對(duì)赭曲霉毒素A產(chǎn)生的影響,結(jié)果表明,多菌靈、抑霉唑、咯菌腈、咪鮮胺可完全抑制炭黑曲霉的生長(zhǎng)及赭曲霉毒素A的產(chǎn)生,是該病害較理想的藥劑。第四,對(duì)VA霉靈、嘧菌酯、腐霉利處理組以及空白對(duì)照組的炭黑曲霉菌進(jìn)行RNA提取,并進(jìn)行差異基因分析。轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果表明,VA霉靈、嘧菌酯、腐霉利對(duì)炭黑曲霉的多個(gè)基因的表達(dá)產(chǎn)生了顯著的影響,造成多個(gè)GO term改變,進(jìn)而影響相關(guān)通路。其中,分子功能中與金屬離子結(jié)合功能相關(guān)的基因、生化過(guò)程中與跨膜運(yùn)輸功能相關(guān)的基因、細(xì)胞組分中與細(xì)胞膜相關(guān)的基因在三個(gè)處理中均產(chǎn)生了大量的差異,進(jìn)而引發(fā)代謝途徑、次生代謝產(chǎn)物生物合成、抗生素生物合成這三個(gè)通路產(chǎn)生差異。這些基因、通路的差異是否影響炭黑曲霉產(chǎn)生赭曲霉毒素A,其作用機(jī)制有待下一步研究。第五,探究在多菌靈或VA霉靈和炭黑曲霉菌混合污染時(shí),在葡萄酒釀造的過(guò)程中,多菌靈或VA霉靈對(duì)炭黑曲霉菌生長(zhǎng)及產(chǎn)毒的影響,同時(shí)對(duì)整個(gè)加工過(guò)程中,赭曲霉毒素A含量及多菌靈和VA霉靈殘留量進(jìn)行跟蹤檢測(cè)與分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):多菌靈或VA霉靈與炭黑曲霉菌的混合污染,這兩種殺菌劑在發(fā)酵期間能夠影響炭黑曲霉的生長(zhǎng),赭曲霉毒素A的含量也會(huì)隨之降低,但經(jīng)過(guò)整個(gè)加工過(guò)程,在成品酒中赭曲霉毒素A的含量沒(méi)有顯著性差異;對(duì)于三種目標(biāo)化合物,每一步驟的加工因子均小于1,這表明在葡萄酒的加工過(guò)程中兩種殺菌劑及赭曲霉毒素A的殘留水平均降低,并且發(fā)酵過(guò)程是該三種化合物濃度降低的主要加工步驟;在澄清步驟,皂土的添加顯著降低了多菌靈的殘留水平,對(duì)VA霉靈和赭曲霉毒素A沒(méi)有明顯的影響。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：X503.231

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4 匡明}，

本文編號(hào)：2627407