【摘要】：葡萄果實味道鮮美,營養(yǎng)價值高,可鮮食,也可制成葡萄酒、葡萄干、葡萄汁等加工制品,備受公眾喜歡。近年來,葡萄的種植面積和產量也在明顯的增加,中國已成為葡萄和葡萄酒生產及消費大國。由于葡萄糖分大,且不易清洗,適合微生物的附著與生長,這就將導致在種植生長、儲藏、運輸等過程中真菌病害的發(fā)生,一些病原真菌不僅能導致果實腐爛,還會產生對人體有危害作用的真菌毒素。為了防治真菌病害的發(fā)生,得到優(yōu)質的葡萄,在整個栽培及儲運階段,殺菌劑的使用必不可少。這就導致生物性危害(病原菌及真菌毒素)和化學性危害(殺菌劑)的混合污染。本論文選取葡萄為研究對象,評價我國北方主產區(qū)采收期葡萄膳食攝入風險,探究葡萄酒加工過程中多菌靈或VA霉靈對炭黑曲霉菌生長及產毒的影響,明晰多菌靈、VA霉靈及赭曲霉毒素A的變化規(guī)律,在轉錄組水平上解析典型農藥抑制炭黑曲霉產毒的機理。為葡萄中生物性危害因子及化學性危害因子的風險評估、加工過程中的赭曲霉毒素A的防控與消除提供理論依據,為從根源上防控炭黑曲霉產毒提供新思路,主要結論如下:第一,建立了葡萄、葡萄酒、葡萄干、葡萄汁中赭曲霉毒素A以及13種常用殺菌劑(甲基硫菌靈,腈菌唑,甲霜靈,嘧霉胺,烯酰嗎啉,戊唑醇,苯醚甲環(huán)唑,抑霉唑,三唑酮,吡唑醚菌酯,咪鮮胺,丙環(huán)唑,嘧菌酯)同步檢測的殘留分析方法,樣品采用乙腈提取,C18凈化,超高效液相色譜-串聯(lián)質譜檢測,外標法定量,平均回收率在73.7% 117.9%之間,相對標準偏差在1.1% 20.1%之間,該方法中赭曲霉毒素A的定量限為0.1μg kg~(-1),13種常用殺菌劑的定量限為1μg kg~(-1)�？焖俸啽�、省時高效,測定濃度范圍寬泛,靈敏度高,定量準確,可用于葡萄及其加工制品中赭曲霉毒素A及13種常用的殺菌劑的同步檢測,為后續(xù)樣品檢測及風險評估工作奠定基礎。第二,對所采集的829份我國北方主產區(qū)采收期的葡萄樣品中13種常用殺菌劑進行殘留量檢測,結果表明13種殺菌劑均有不同程度的檢出,鮮食葡萄樣品中,農藥多殘留現(xiàn)象較為嚴重,但殘留水平較低,大多數屬于痕量級別。結合人類平均膳食消費數據、人群平均體重數據,基于Monte Carlo數學概率模型對國內葡萄中主要殺菌劑的膳食攝入風險進行評估,結果表明,13種常用殺菌劑的慢性膳食攝入風險都比較低,均為可接受風險,急性膳食攝入風險較高,但都處于可接受水平,其中戊唑醇的急性膳食攝入風險較高,已經達到91.37%,在農藥使用及日常膳食攝入風險方面都應引起廣泛關注。本研究可為中國葡萄質量安全監(jiān)管以及今后系統(tǒng)開展農產品質量安全風險評估工作提供參考。第三,評估葡萄中常用的殺菌劑對炭黑曲霉菌落生長及赭曲霉毒素A產生的影響,采用菌絲生長速率法測定各殺菌劑對炭黑曲霉菌落生長的抑制效果,同時對其產生的赭曲霉毒素A進行提取測定,比較不同殺菌劑對赭曲霉毒素A產生的影響,結果表明,多菌靈、抑霉唑、咯菌腈、咪鮮胺可完全抑制炭黑曲霉的生長及赭曲霉毒素A的產生,是該病害較理想的藥劑。第四,對VA霉靈、嘧菌酯、腐霉利處理組以及空白對照組的炭黑曲霉菌進行RNA提取,并進行差異基因分析。轉錄組分析結果表明,VA霉靈、嘧菌酯、腐霉利對炭黑曲霉的多個基因的表達產生了顯著的影響,造成多個GO term改變,進而影響相關通路。其中,分子功能中與金屬離子結合功能相關的基因、生化過程中與跨膜運輸功能相關的基因、細胞組分中與細胞膜相關的基因在三個處理中均產生了大量的差異,進而引發(fā)代謝途徑、次生代謝產物生物合成、抗生素生物合成這三個通路產生差異。這些基因、通路的差異是否影響炭黑曲霉產生赭曲霉毒素A,其作用機制有待下一步研究。第五,探究在多菌靈或VA霉靈和炭黑曲霉菌混合污染時,在葡萄酒釀造的過程中,多菌靈或VA霉靈對炭黑曲霉菌生長及產毒的影響,同時對整個加工過程中,赭曲霉毒素A含量及多菌靈和VA霉靈殘留量進行跟蹤檢測與分析,結果發(fā)現(xiàn):多菌靈或VA霉靈與炭黑曲霉菌的混合污染,這兩種殺菌劑在發(fā)酵期間能夠影響炭黑曲霉的生長,赭曲霉毒素A的含量也會隨之降低,但經過整個加工過程,在成品酒中赭曲霉毒素A的含量沒有顯著性差異;對于三種目標化合物,每一步驟的加工因子均小于1,這表明在葡萄酒的加工過程中兩種殺菌劑及赭曲霉毒素A的殘留水平均降低,并且發(fā)酵過程是該三種化合物濃度降低的主要加工步驟;在澄清步驟,皂土的添加顯著降低了多菌靈的殘留水平,對VA霉靈和赭曲霉毒素A沒有明顯的影響。
【學位授予單位】：沈陽農業(yè)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：X503.231

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本文編號：2627407