本文關鍵詞：兩種鄰苯二甲酸酯抗體的制備、酶聯(lián)免疫分析方法的建立及應用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鄰苯二甲酸酯類化合物(Phthalate esters,PAEs)是一種增塑劑,被廣泛用于工業(yè)生產(chǎn)和食品包裝材料中。然而,由于PAEs在生產(chǎn)、使用和廢棄處理過程中,很容易解離并進入環(huán)境中,可造成PAEs在環(huán)境中的普遍殘留,從而對環(huán)境與人類健康產(chǎn)生不利的影響。為了調(diào)查環(huán)境中此類污染物的分布狀況,評估其潛在的環(huán)境危害,有必要建立一種針對環(huán)境中痕量PAEs高效可靠的分析方法。而鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)及鄰苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate,DEP)是環(huán)境中被普遍檢出的兩種典型PAEs。目前,DBP與DEP的檢測方法主要集中于氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS)、高效液相色譜質(zhì)譜法(LC-MS)、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS/MS)等儀器方法,這些方法具有準確定量的優(yōu)勢,但是,檢測成本高、樣品預處理復雜和檢測周期長等不足限制了其進一步推廣。與此相比,基于抗原/抗體的酶聯(lián)免疫分析方法(ELISA)則具有高通量、高特異性和簡單快速等特點,在環(huán)境分析中已經(jīng)得到了廣泛應用。因此本研究合成了兩種針對DBP與DEP的半抗原,免疫動物分別得到了相應的抗體。在此基礎上,分別建立了DBP與DEP的ELISA分析方法,并將其成功用于實際水體及食品介質(zhì)中該類塑化劑的分析檢測,本研究可為進一步的污染調(diào)查和風險評估提供技術支撐。主要研究內(nèi)容如下:1.本研究成功合成了半抗原—4-氨基鄰苯二甲酸二丁酯(4-DBAP),并以重氮化法制備了免疫原DBAP-BSA,對新西蘭大白兔免疫后,得到了DBP的多克隆抗體,其效價為25.6×104,本抗體僅對鄰苯二甲酸丁芐酯和鄰苯二甲酸二乙酯有交叉反應,其交叉反應率分別是22.5%和1.08%。通過一系列條件優(yōu)化,建立了DBP殘留檢測的間接競爭ELISA方法,IC50值為421 ng/mL,線性范圍為70~1600 ng/mL,相關系數(shù)R2為0.9918,LOD為66.6 ng/mL,加標回收回收率在79.7%~105.4%之間,變異系數(shù)在3.25%~10.2%之間。2.本研究成功合成了半抗原—4-氨基鄰苯二甲酸二乙酯(4-DEAP),并以戊二醛法制備了免疫原DEAP-BSA,對Balb/C小鼠免疫后,成功制備出DEP單克隆抗體細胞株4G2,其效價為9×104,本抗體僅對鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸單乙酯及鄰苯二甲酸丁芐酯有交叉反應,其交叉反應率分別是4.29%、2.03%、0.035%。通過一系列條件優(yōu)化,建立了DEP殘留檢測的間接競爭ELISA方法,IC50值為72 ng/mL,線性范圍為20~320ng/mL,相關系數(shù)R2為0.9916,檢測限LOD為11.9 ng/mL,加標回收率在76.3%~103.6%之間,變異系數(shù)在2.67%~11.48%之間。3.利用上述建立的方法對鎮(zhèn)江地區(qū)部分小型淺水河流中水體、底泥以及牛奶、咖啡、白酒等常見食品中的DBP和DEP含量進行了測定,結果表明,在市區(qū)河流中均存在DBP與DEP的污染(除玉帶河因定期清淤,故水質(zhì)較好),且污染較為嚴重,亟需治理。而食品中DBP與DEP的殘留分別為:ND~300.8ng/mL和ND~112.3 ng/mL,其中DBP在食品中的分布為:白酒咖啡牛奶�？傮w表明,所檢食品中兩種PAEs濃度均低于國家食品安全標準。
【關鍵詞】：鄰苯二甲酸二丁酯 鄰苯二甲酸二乙酯 抗體 酶聯(lián)免疫分析方法 環(huán)境水體
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：X830
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 縮略詞12-13
• 第一章 緒論13-29
• 1.1 引言13
• 1.2 鄰苯二甲酸酯概述13-17
• 1.2.1 PAEs的理化性質(zhì)13-15
• 1.2.2 PAEs的危害15
• 1.2.3 PAEs的限量標準15-17
• 1.3 環(huán)境及食品中PAEs的污染狀況17-19
• 1.3.1 環(huán)境水體中PAEs的污染狀況17
• 1.3.2 大氣中PAEs的污染狀況17-18
• 1.3.3 土壤中PAEs的污染狀況18-19
• 1.3.4 食品中PAEs的污染狀況19
• 1.4 鄰苯二甲酸酯的儀器檢測方法19-23
• 1.4.1 光譜法19-20
• 1.4.2 色譜法20-23
• 1.5 免疫分析方法23-27
• 1.5.1 免疫分析方法的基本原理23-25
• 1.5.2 放射免疫分析方法25
• 1.5.3 化學發(fā)光免疫分析方法25
• 1.5.4 熒光免疫分析方法25-26
• 1.5.5 電化學發(fā)光免疫分析方法26
• 1.5.6 酶免疫分析方法26-27
• 1.6 本研究的目的和意義27
• 1.7 研究內(nèi)容27-29
• 第二章 鄰苯二甲酸二丁酯多克隆抗體的制備、酶聯(lián)免疫分析方法的建立及應用29-59
• 2.1 實驗材料29-32
• 2.1.1 試劑和藥品29-30
• 2.1.2 儀器與設備30-31
• 2.1.3 溶液配置31
• 2.1.4 實驗動物31-32
• 2.2 實驗方法32-42
• 2.2.1 透析袋的預處理32
• 2.2.2 DBP半抗原的制備32-33
• 2.2.3 DBP免疫原和包被原的制備33-34
• 2.2.4 動物免疫34-35
• 2.2.5 制備血清35
• 2.2.6 抗血清的篩選35-38
• 2.2.7 間接競爭ELISA方法的優(yōu)化38-40
• 2.2.8 環(huán)境水體及食品樣本中DBP的檢測40-42
• 2.3 結果與討論42-58
• 2.3.1 DBP免疫半抗原的鑒定42-44
• 2.3.2 DBP免疫原和包被原的鑒定44-45
• 2.3.3 抗血清的篩選45-46
• 2.3.4 ELISA方法的優(yōu)化46-54
• 2.3.5 鎮(zhèn)江環(huán)境水體及食品中DBP的檢測54-58
• 2.4 本章小結58-59
• 第三章 鄰苯二甲酸二乙酯單克隆抗體的制備、酶聯(lián)免疫分析方法的建立及應用59-88
• 3.1 實驗材料59-61
• 3.1.1 試劑和藥品59
• 3.1.2 儀器與設備59-60
• 3.1.3 溶液配置60-61
• 3.1.4 實驗動物61
• 3.2 實驗方法61-72
• 3.2.1 透析袋的預處理61-62
• 3.2.2 DEP半抗原的制備62-63
• 3.2.3 DEP免疫原和包被原的制備63
• 3.2.4 動物免疫63-64
• 3.2.5 制備血清64
• 3.2.6 抗血清的篩選64-66
• 3.2.7 單克隆抗體的制備66-70
• 3.2.8 間接競爭ELISA方法的優(yōu)化70-71
• 3.2.9 環(huán)境及食品樣本中DEP的檢測71-72
• 3.3 結果與討論72-87
• 3.3.1 DEP免疫半抗原的鑒定72-74
• 3.3.2 DEP免疫原和包被原的鑒定74-75
• 3.3.3 抗血清的篩選75
• 3.3.4 單克隆抗體的制備75-76
• 3.3.5 ELISA方法的優(yōu)化76-84
• 3.3.6 鎮(zhèn)江環(huán)境水體及食品中DEP的檢測84-87
• 3.4 本章小結87-88
• 第四章 結論與展望88-90
• 4.1 結論88-89
• 4.2 展望89-90
• 參考文獻90-98
• 致謝98-99
• 碩士期間所發(fā)表論文99

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