本文選題：消毒劑抗性菌　切入點(diǎn)：海河流域　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景消毒是控制病原微生物傳播的主要措施,已廣泛應(yīng)用于人們的日常生活、醫(yī)院、食品加工、日化用品和畜牧水產(chǎn)養(yǎng)殖等方面,但伴隨而來的細(xì)菌對(duì)消毒劑的抗性問題也引起了人們的重視。細(xì)菌對(duì)消毒劑產(chǎn)生抗性后,會(huì)出現(xiàn)選擇性細(xì)菌,即具有強(qiáng)的適應(yīng)性和抵抗力的細(xì)菌得以存活,從而出現(xiàn)更難以控制和治愈的感染,消毒劑抗性菌已是導(dǎo)致醫(yī)院院內(nèi)感染的主要因素。消毒劑抗性菌是指對(duì)常用消毒劑濃度不再敏感的菌株,也就是即在可以殺滅或抑制絕大部分細(xì)菌的消毒劑濃度下,消毒劑抗性菌卻不能被殺滅或抑制。一般以分離菌株的最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC)或最小殺菌濃度(minimal bactericidal concentration,MBC)與標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC或MBC對(duì)比進(jìn)行判定。細(xì)菌對(duì)消毒劑產(chǎn)生抗性的機(jī)理主要包括固有性抗性和獲得性抗性兩個(gè)方面。固有性抗性主要是由細(xì)菌自身的某些結(jié)構(gòu)或性能所決定的,例如細(xì)菌芽孢可以阻止消毒劑進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi),革蘭氏陰性菌因?yàn)槠浼?xì)胞壁結(jié)構(gòu)與革蘭氏陽性菌不同而對(duì)消毒劑表現(xiàn)更強(qiáng)的耐受。獲得性抗性是指細(xì)菌從環(huán)境中獲得了某些消毒劑抗性基因,并且這些消毒劑抗性基因在細(xì)菌體內(nèi)表達(dá)而導(dǎo)致對(duì)消毒劑的抗性。消毒劑抗性基因按其表達(dá)方式主要分為質(zhì)粒介導(dǎo)表達(dá)和染色體介導(dǎo)表達(dá)兩類。目前,對(duì)消毒劑抗性基因研究較多的是QAC基因家族,研究發(fā)現(xiàn)有八種QAC基因可以由質(zhì)粒介導(dǎo)表達(dá),包括qacA/B、qacE、qacEΔ1、qacF、qacG、qacH、qacI以及sugE(p),這些基因可以在細(xì)菌之間水平和垂直傳播。染色體介導(dǎo)表達(dá)的抗性基因sugE(c)、emrE、ydgE/ydgF、mdfA,賦予了細(xì)菌對(duì)QACs的抗性。消毒劑抗性基因可以在細(xì)菌之間接合轉(zhuǎn)移,其對(duì)環(huán)境微生物安全的影響不容忽視。研究目的本論文將以水環(huán)境微生物安全評(píng)價(jià)常用指標(biāo)菌——大腸桿菌為對(duì)照,以常用消毒劑——次氯酸鈉、碘伏和苯扎溴銨為研究對(duì)象,針對(duì)天津海河流域開展消毒劑抗性菌抗性水平評(píng)估,并分析消毒劑抗性菌的生物譜,了解主要消毒劑抗性基因的污染水平,為消毒劑抗性菌的環(huán)境安全評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。研究方法1.天津海河流域水環(huán)境中消毒劑抗性菌抗性水平評(píng)估:選擇天津海河流域不同地點(diǎn)采樣,以大腸桿菌ATCC 25922為對(duì)照,選取次氯酸鈉、碘伏、苯扎溴銨3種消毒劑,通過MIC和MBC試驗(yàn),開展消毒劑抗性菌的抗性水平研究,并利用PCR技術(shù)分析典型消毒劑抗性基因在消毒劑抗性菌中的檢出情況。2.天津海河流域水環(huán)境中消毒劑抗性菌生物譜分析:針對(duì)天津海河流域不同斷面采樣點(diǎn)的水樣,對(duì)MIC和MBC試驗(yàn)樣品中最高消毒劑濃度下存活的抗性菌,利用16S rRNA擴(kuò)增子測(cè)序技術(shù),分析不同水樣對(duì)3種消毒劑的MIC和MBC試驗(yàn)樣品中消毒劑抗性菌的生物譜。3.天津海河流域水環(huán)境中典型消毒劑抗性基因污染水平調(diào)查:正壓抽濾方法濃集水樣中細(xì)菌,利用試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),采用SYBR GREEN染料法,對(duì)樣品中典型消毒劑抗性基因進(jìn)行定量檢測(cè)。研究結(jié)果1.天津海河流域水環(huán)境中消毒劑抗性菌抗性水平:ATCC 25922對(duì)次氯酸鈉的MIC和MBC均為250 mg/L,碘伏MIC為90 mg/L,MBC在90~120 mg/L,苯扎溴銨MIC和MBC均為60 mg/L。而各采樣點(diǎn)的次氯酸鈉MIC和MBC在850~1350 mg/L,碘伏MIC和MBC在120~270 mg/L,苯扎溴銨除南運(yùn)河外其他采樣點(diǎn)MIC和MBC在90~270mg/L,均高于對(duì)照菌株。而在24個(gè)MIC樣品中,qacA/B和qacG基因均未檢出;qacEΔ1基因檢出率為(10/24),qacE、emrE基因檢出率為(3/24),sugE(p)基因檢出率為(2/24),sugE(c)檢出率為(6/24),ydgE/ydgF檢出率為(7/24)。2.天津海河流域消毒劑抗性菌的生物譜分析:在次氯酸鈉、碘伏和苯扎溴銨共計(jì)38個(gè)MIC和MBC樣品中,變形菌門和厚壁菌門檢出相對(duì)較多。在南運(yùn)河碘伏MIC中檢測(cè)到較高豐度的藍(lán)藻門和放線菌門,金剛橋苯扎溴銨MIC中也檢測(cè)到一定豐度的放線菌門。次氯酸鈉MIC和MBC樣品中,檢出頻率相對(duì)較多的種屬有:芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、Jeotgalibacillus屬、枝芽孢桿菌屬以及賴氨酸芽孢桿菌屬。碘伏MIC和MBC樣品中,相對(duì)豐度較高的種屬有:假單胞菌屬、芽孢桿菌屬、氣單胞菌屬、Synechococcus屬、乳酸桿菌屬。苯扎溴銨MIC和MBC樣品中,相對(duì)豐度較高的種屬有:假單胞菌屬、氣單胞菌屬、普羅維登斯菌屬、摩根菌屬、芽孢桿菌屬。3.天津海河流域水環(huán)境中消毒劑抗性基因污染情況:水樣中季銨鹽類消毒劑抗性基因qacE、qacE△1和qacG基因在8個(gè)采樣點(diǎn)均有檢出,而qacA/B基因在8個(gè)采樣點(diǎn)均未檢出,ydgE和ydgF基因在上、中游采樣點(diǎn)均有檢出,sug E(c)、sugE(p)和emrE基因在南運(yùn)河、金剛橋、大光明橋和外環(huán)路4個(gè)采樣點(diǎn)檢測(cè)為陽性。qacE和qacE△1基因定量結(jié)果達(dá)到102-104拷貝/m L,qacG基因達(dá)到102-103拷貝/m L。染色體型消毒劑抗性基因sugE(p)、sugE(c)、emrE可以達(dá)到100~103拷貝/m L,而ydgE和ydgF基因達(dá)到101~102拷貝/m L。研究結(jié)論與水環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的大腸桿菌相比較,天津海河流域水環(huán)境中的細(xì)菌對(duì)常見消毒劑的抗性水平較高,其中包括變形菌門、厚壁菌門、藍(lán)藻門和放線菌門等門的細(xì)菌。而芽孢桿菌和假單胞菌在抗性菌中豐度相對(duì)較高,另外,在上游采樣點(diǎn)還發(fā)現(xiàn)有氣單胞菌、普羅維登斯菌和摩根菌等條件致病菌。天津海河流域水環(huán)境中細(xì)菌季銨鹽類消毒劑抗性基因存在一定的攜帶率,其中可移動(dòng)元件介導(dǎo)的消毒劑抗性基因較高。
[Abstract]:The research background disinfection is the main measure to control the spread of pathogenic microorganisms , which has been widely used in daily life , hospital , food processing , daily necessities and animal husbandry aquaculture . The results showed that the MIC and MBC of the disinfectant in the water environment of Tianjin Hahe River Basin were 250 mg / L , 90 mg / L respectively . The results showed that the resistance genes qacE , qacE 鈻，

本文編號(hào)：1692243