本文關(guān)鍵詞：典型溴苯類阻燃劑甲狀腺激素受體干擾效應(yīng)分子機制研究　出處：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：溴苯阻燃劑在聚苯乙烯樹脂、紡織、涂料、合成橡膠、電子電器等產(chǎn)品中應(yīng)用廣泛,其殘留在空氣、水體和土壤等多種環(huán)境介質(zhì)以及生物體中均被檢測出。溴苯阻燃劑暴露導(dǎo)致的潛在毒性引起了廣泛關(guān)注,然而目前關(guān)于溴苯阻燃劑的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)研究相對較少,尤其是關(guān)于甲狀腺激素受體(Thyroid receptor,TR)干擾效應(yīng)報道匱乏,其分子作用機制尚不明晰。本文選取六種新型溴苯阻燃劑(BTBPE,DBDPE,HBB,PBEB,pTBX,T BPhA),采用雙熒光素酶報告基因和人重組基因酵母雙雜方法研究了其誘導(dǎo)的TR干擾效應(yīng),并從分子起始事件(Molecular initiating event,MIE)角度出發(fā),采用熒光光譜技術(shù)分析了溴苯阻燃劑與TRβ受體配體結(jié)合域(Ligand binding domain,LBD)的分子交互作用,探討了潛在的TR干擾效應(yīng)分子機制。同時考察了CYP450酶介導(dǎo)的生物轉(zhuǎn)化對六種溴苯阻燃劑TR拮抗效應(yīng)的增毒/減毒效應(yīng),主要研究結(jié)果如下:(1)采用雙熒光素酶報告基因方法,利用轉(zhuǎn)染了人甲狀腺激素受體pGal4-L-TR質(zhì)粒的CV-1細(xì)胞,評估了六種阻燃劑的TR干擾效應(yīng)。六種阻燃劑在實驗設(shè)置濃度梯度(1×10~(-10)M、1×10~(-9) M、1×10~(-8)M、1×10~(-7) M、1×10~(-6)M)下均無顯著TR激動效應(yīng),但BTB PE,HBB和PBEB具有拮抗效應(yīng)并呈顯著劑量-效應(yīng)關(guān)系,其對TR的最大拮抗率分別為60%,62%和66%。(2)采用人肝微粒體(Human liver microsomes,HLM)及人CYP3A4酶,研究了其對六種阻燃劑的生物轉(zhuǎn)化并分析了其轉(zhuǎn)化后TR拮抗效應(yīng)的變化,發(fā)現(xiàn)BTBPE和PBEB具有代謝減毒現(xiàn)象。經(jīng)HLM轉(zhuǎn)化后BTBPE的TR拮抗率由22.69%降低至12.19%,經(jīng)CYP3A4轉(zhuǎn)化后BTBPE的TR拮抗率由22.69%降低至13.59%。經(jīng)HLM轉(zhuǎn)化后PBEB的TR拮抗率由27.68%降低至13.27%,經(jīng)CYP3A4酶轉(zhuǎn)化后PBEB的TR拮抗率由27.68%降低至14.64%。HBB經(jīng)HLM和CYP3A4酶介導(dǎo)的生物轉(zhuǎn)化后,其TR拮抗效應(yīng)沒有顯著變化。CYP3A4酶是介導(dǎo)BTBPE和PBEB生物轉(zhuǎn)化的主要酶之一,對該類物質(zhì)的風(fēng)險評價需全面考慮其生物轉(zhuǎn)化導(dǎo)致的潛在影響。(3)采用P450-GloTM CYP3A4(Luciferin-IPA)檢測方法研究了BTBPE,HBB和PB EB對CYP3A4酶活性的影響,發(fā)現(xiàn)BTBPE,HBB和PBEB能夠抑制CYP3A4酶活性并具有明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。BTBPE,HBB和PBEB能夠抑制CYP3A4酶活性,其半數(shù)抑制濃度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)分別為0.33μM,0.52μM和0.65 μM。以CYP3A4酶強抑制劑酮康唑為陽性對照,所測IC50為0.16μM,表明BT BPE,HBB和PBEB是CYP3A4酶的較強抑制劑,能夠干擾CYP3A4酶介導(dǎo)的內(nèi)源和外源性物質(zhì)的正常代謝過程。(4)采用穩(wěn)態(tài)熒光光譜實驗和熒光壽命實驗研究了 BTBPE,HBB和PBEB與TRβLBD蛋白的相互作用。三種新型溴苯阻燃劑能引起TRβLBD蛋白的靜態(tài)猝滅,與TRβLBD蛋白結(jié)合力大小依次為PBEBHBBBTBPE,與其TR拮抗效應(yīng)強弱順序一致,表明其與TRβ LBD分子交互作用可能是導(dǎo)致其TR拮抗效應(yīng)的重要原因之一。三種阻燃劑主要通過靜電作用和疏水作用等與TRβ LBD蛋白發(fā)生分子交互作用。綜上所述,BTBPE,HBB和PBEB具有顯著的TR拮抗效應(yīng);三種阻燃劑主要通過靜電作用和疏水作用與TRβ LBD蛋白相互作用,這可能是引起其TR拮抗效應(yīng)的MIE事件。BTBPE和PBEB的TR拮抗效應(yīng)經(jīng)HLM或CYP3A4酶介導(dǎo)的生物轉(zhuǎn)化后呈顯著代謝減毒效應(yīng),這提示對該類阻燃劑的毒性風(fēng)險評估需要充分考慮生物轉(zhuǎn)化的影響因素。
[Abstract]:Six kinds of flame retardants ( BTBPE , DBDPE , HBB , PBEB , pTBX , TBPhA ) were used to investigate the effect of the molecular mechanism of six kinds of flame retardants . The results were as follows : ( 1 ) Six kinds of novel bromobenzene flame retardants ( BTBPE , DBDPE , HBB , PBEB , pTBX , T BPhA ) were used to investigate the effect of molecular mechanism . The effects of BTBPE , HBB and PBEB on the activities of CYP3A4 enzyme were studied . The results showed that BTBPE , HBB and PBEB could inhibit the CYP3A4 enzyme activity .

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：X592

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳健龍;張玉玲;董宇;貢濟宇;崔翰明;;Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu價小檗堿對肝微粒體CYP450酶的抑制作用[J];中國中藥雜志;2013年12期

2 陳曉波;李崧;;銅、鈉和鉬離子與牛血清白蛋白作用的熒光光譜研究[J];光譜學(xué)與光譜分析;2006年02期

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本文編號：1388344