本文關鍵詞：典型溴苯類阻燃劑甲狀腺激素受體干擾效應分子機制研究　出處：《浙江大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：溴苯阻燃劑在聚苯乙烯樹脂、紡織、涂料、合成橡膠、電子電器等產(chǎn)品中應用廣泛,其殘留在空氣、水體和土壤等多種環(huán)境介質(zhì)以及生物體中均被檢測出。溴苯阻燃劑暴露導致的潛在毒性引起了廣泛關注,然而目前關于溴苯阻燃劑的內(nèi)分泌干擾效應研究相對較少,尤其是關于甲狀腺激素受體(Thyroid receptor,TR)干擾效應報道匱乏,其分子作用機制尚不明晰。本文選取六種新型溴苯阻燃劑(BTBPE,DBDPE,HBB,PBEB,pTBX,T BPhA),采用雙熒光素酶報告基因和人重組基因酵母雙雜方法研究了其誘導的TR干擾效應,并從分子起始事件(Molecular initiating event,MIE)角度出發(fā),采用熒光光譜技術分析了溴苯阻燃劑與TRβ受體配體結(jié)合域(Ligand binding domain,LBD)的分子交互作用,探討了潛在的TR干擾效應分子機制。同時考察了CYP450酶介導的生物轉(zhuǎn)化對六種溴苯阻燃劑TR拮抗效應的增毒/減毒效應,主要研究結(jié)果如下:(1)采用雙熒光素酶報告基因方法,利用轉(zhuǎn)染了人甲狀腺激素受體pGal4-L-TR質(zhì)粒的CV-1細胞,評估了六種阻燃劑的TR干擾效應。六種阻燃劑在實驗設置濃度梯度(1×10~(-10)M、1×10~(-9) M、1×10~(-8)M、1×10~(-7) M、1×10~(-6)M)下均無顯著TR激動效應,但BTB PE,HBB和PBEB具有拮抗效應并呈顯著劑量-效應關系,其對TR的最大拮抗率分別為60%,62%和66%。(2)采用人肝微粒體(Human liver microsomes,HLM)及人CYP3A4酶,研究了其對六種阻燃劑的生物轉(zhuǎn)化并分析了其轉(zhuǎn)化后TR拮抗效應的變化,發(fā)現(xiàn)BTBPE和PBEB具有代謝減毒現(xiàn)象。經(jīng)HLM轉(zhuǎn)化后BTBPE的TR拮抗率由22.69%降低至12.19%,經(jīng)CYP3A4轉(zhuǎn)化后BTBPE的TR拮抗率由22.69%降低至13.59%。經(jīng)HLM轉(zhuǎn)化后PBEB的TR拮抗率由27.68%降低至13.27%,經(jīng)CYP3A4酶轉(zhuǎn)化后PBEB的TR拮抗率由27.68%降低至14.64%。HBB經(jīng)HLM和CYP3A4酶介導的生物轉(zhuǎn)化后,其TR拮抗效應沒有顯著變化。CYP3A4酶是介導BTBPE和PBEB生物轉(zhuǎn)化的主要酶之一,對該類物質(zhì)的風險評價需全面考慮其生物轉(zhuǎn)化導致的潛在影響。(3)采用P450-GloTM CYP3A4(Luciferin-IPA)檢測方法研究了BTBPE,HBB和PB EB對CYP3A4酶活性的影響,發(fā)現(xiàn)BTBPE,HBB和PBEB能夠抑制CYP3A4酶活性并具有明顯的劑量-效應關系。BTBPE,HBB和PBEB能夠抑制CYP3A4酶活性,其半數(shù)抑制濃度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)分別為0.33μM,0.52μM和0.65 μM。以CYP3A4酶強抑制劑酮康唑為陽性對照,所測IC50為0.16μM,表明BT BPE,HBB和PBEB是CYP3A4酶的較強抑制劑,能夠干擾CYP3A4酶介導的內(nèi)源和外源性物質(zhì)的正常代謝過程。(4)采用穩(wěn)態(tài)熒光光譜實驗和熒光壽命實驗研究了 BTBPE,HBB和PBEB與TRβLBD蛋白的相互作用。三種新型溴苯阻燃劑能引起TRβLBD蛋白的靜態(tài)猝滅,與TRβLBD蛋白結(jié)合力大小依次為PBEBHBBBTBPE,與其TR拮抗效應強弱順序一致,表明其與TRβ LBD分子交互作用可能是導致其TR拮抗效應的重要原因之一。三種阻燃劑主要通過靜電作用和疏水作用等與TRβ LBD蛋白發(fā)生分子交互作用。綜上所述,BTBPE,HBB和PBEB具有顯著的TR拮抗效應;三種阻燃劑主要通過靜電作用和疏水作用與TRβ LBD蛋白相互作用,這可能是引起其TR拮抗效應的MIE事件。BTBPE和PBEB的TR拮抗效應經(jīng)HLM或CYP3A4酶介導的生物轉(zhuǎn)化后呈顯著代謝減毒效應,這提示對該類阻燃劑的毒性風險評估需要充分考慮生物轉(zhuǎn)化的影響因素。
[Abstract]:Six kinds of flame retardants ( BTBPE , DBDPE , HBB , PBEB , pTBX , TBPhA ) were used to investigate the effect of the molecular mechanism of six kinds of flame retardants . The results were as follows : ( 1 ) Six kinds of novel bromobenzene flame retardants ( BTBPE , DBDPE , HBB , PBEB , pTBX , T BPhA ) were used to investigate the effect of molecular mechanism . The effects of BTBPE , HBB and PBEB on the activities of CYP3A4 enzyme were studied . The results showed that BTBPE , HBB and PBEB could inhibit the CYP3A4 enzyme activity .

【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：X592

【參考文獻】

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1 陳健龍;張玉玲;董宇;貢濟宇;崔翰明;;Cocktail探針藥物法評價小檗堿對肝微粒體CYP450酶的抑制作用[J];中國中藥雜志;2013年12期

2 陳曉波;李崧;;銅、鈉和鉬離子與牛血清白蛋白作用的熒光光譜研究[J];光譜學與光譜分析;2006年02期

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本文編號：1388344