本文關(guān)鍵詞：納米銀對草地貪夜蛾Sf9細(xì)胞和家蠶生長的影響與組學(xué)分析　出處：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：納米銀(Ag nanoparticles,AgNPs)作為納米材料,廣泛的應(yīng)用在生物醫(yī)藥、食品包裝等領(lǐng)域,它給人類帶來利益的同時(shí)也給人類健康和生態(tài)環(huán)境帶來了潛在危害。在哺乳動物研究中證實(shí)AgNPs能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生毒性效應(yīng)。雖然許多研究已經(jīng)評價(jià)了AgNPs的毒性作用,但其對昆蟲的危害和環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)方面的研究很少。本研究中,以草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9細(xì)胞和家蠶作為研究對象,通過添加不同濃度AgNPs,評估了AgNPs對Sf9細(xì)胞生長狀態(tài)以及對家蠶體重、繭層重、成蛾率的影響;在轉(zhuǎn)錄水平上,通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析了AgNPs對家蠶中腸轉(zhuǎn)錄水平的影響;在蛋白質(zhì)水平上,通過二維電泳(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)技術(shù)分析了AgNPs對家蠶中腸和脂肪體蛋白質(zhì)組學(xué)差異,并應(yīng)用熒光定量PCR(Realtime fluorescence quantitative PCR,qPCR)技術(shù)對差異表達(dá)基因或蛋白質(zhì)進(jìn)行了驗(yàn)證。本研究論文的主要結(jié)果如下:(1)添加不同濃度的AgNPs到Sf9細(xì)胞中,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在添加10 mg L-1 AgNPs后,Sf9細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,部分細(xì)胞由圓形變?yōu)樗笮秃推渌麩o規(guī)則形態(tài),且在50,100 mg L-1AgNPs濃度條件下,細(xì)胞顯著呈現(xiàn)內(nèi)溶物流出,導(dǎo)致細(xì)胞死亡;隨著AgNPs添加劑量的增加,Sf9細(xì)胞死亡情況進(jìn)一步加重。(2)不同濃度的AgNPs對家蠶生長發(fā)育的影響:研究結(jié)果表明AgNPs在小于400 mg L-1條件下促進(jìn)家蠶生長;在800 mg L-1條件下雖然對家蠶生長具有促進(jìn)作用,但能誘發(fā)家蠶致死;隨著添加AgNPs濃度的增加家蠶死籠率顯著上升,成蛾率顯著下降。(3)AgNPs對家蠶中腸轉(zhuǎn)錄水平的影響:添加AgNPs(100 mg L-1)后,家蠶中腸轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果表明,有252個(gè)基因出現(xiàn)差異表達(dá),其中173個(gè)上調(diào)表達(dá),79個(gè)下調(diào)表達(dá)。在差異表達(dá)基因中有43個(gè)基因顯著差異,包含39個(gè)上調(diào)表達(dá)和4個(gè)下調(diào)表達(dá)。GO分析發(fā)現(xiàn),AgNPs能夠誘發(fā)參與跨膜運(yùn)輸,碳水化合物代謝過程的相關(guān)基因顯著差異表達(dá);KEGG分析發(fā)現(xiàn),參與半乳糖代謝、氮代謝、氨基酸和核苷酸糖代謝的基因呈現(xiàn)出顯著性的差異表達(dá)。(4)AgNPs對家蠶蛋白質(zhì)組的影響:通過2-DE技術(shù)對家蠶中腸蛋白質(zhì)進(jìn)行差異表達(dá)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)14個(gè)顯著蛋白差異點(diǎn),11個(gè)蛋白點(diǎn)顯著下調(diào)表達(dá),3個(gè)蛋白點(diǎn)顯著上調(diào)表達(dá),qPCR驗(yàn)證結(jié)果顯示9個(gè)蛋白差異點(diǎn)在轉(zhuǎn)錄水平與蛋白質(zhì)水平相一致;通過對家蠶脂肪體蛋白質(zhì)差異分析,發(fā)現(xiàn)13個(gè)顯著蛋白差異點(diǎn),9個(gè)蛋白點(diǎn)顯著下調(diào)表達(dá),4個(gè)蛋白點(diǎn)顯著上調(diào)表達(dá);qPCR驗(yàn)證結(jié)果顯示7個(gè)蛋白點(diǎn)被驗(yàn)證;分析發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)蛋白主要在抗氧化應(yīng)激、碳代謝和氨基酸代謝等過程中發(fā)揮重要作用。研究結(jié)果表明:AgNPs能夠給誘發(fā)Sf9細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化,細(xì)胞死亡;經(jīng)口添食AgNPs能夠誘發(fā)家蠶產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng),并導(dǎo)致自由氧(Reactive oxygen species,ROS)水平上升,對家蠶消化系統(tǒng)產(chǎn)生毒害作用;AgNPs能夠?qū)倚Q碳代謝和氨基酸代謝通路中的調(diào)控蛋白產(chǎn)生影響,使家蠶抵抗氧化應(yīng)激的能力減弱,對家蠶細(xì)胞的程序性死亡產(chǎn)生影響,誘發(fā)細(xì)胞壞死。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：X174

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1351736