【摘要】： 目的 腦是人體的中樞生命器官，也是暴力損傷中極易受累的器官。顱腦損傷的發(fā)生率及重型顱腦損傷病人的死殘率均甚高。作為法醫(yī)工作者，關(guān)心的方面在于影響腦損傷種類(lèi)、損傷程度的因素，如機(jī)械性暴力的大小、作用方向、作用次數(shù)、致傷物的性狀、受傷時(shí)的體位及運(yùn)動(dòng)狀態(tài)、損傷部位，以及腦損傷后的改變，如腦缺血缺氧、腦水腫、顱內(nèi)壓的變化等。其中損傷后腦組織各種指標(biāo)的改變與損傷形成時(shí)間、損傷程度的關(guān)系一直是法醫(yī)工作者潛心研究的重要課題。 本實(shí)驗(yàn)從自行設(shè)計(jì)大鼠腦損傷落體打擊器開(kāi)始，先行建立了一個(gè)便于觀察和施加處理因素、控制性好、重復(fù)性好的動(dòng)物模型，選用30g擊錘從25cm高處下落，沖擊應(yīng)力σd為355.09Kpa，打擊大鼠右頂部，造成中等程度的閉合性腦損傷，從病理形態(tài)學(xué)、組織超微結(jié)構(gòu)觀察及微管相關(guān)蛋白-2(microtubule associated protein 2，MAP-2)、環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase 2，COX-2)、膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glial cell line-derived neutrophic factor，GDNF)、Caspase-3基因及蛋白表達(dá)的時(shí)間性變化，詳盡系統(tǒng)地闡述腦損傷后各指標(biāo)變化的時(shí)間規(guī)律性及表達(dá)差異可能的形成機(jī)制。并通過(guò)上述指標(biāo)分別與神經(jīng)元特異性標(biāo)志物神經(jīng)元核蛋白(neuronal nuclear protein，NeuN)和星形膠質(zhì)細(xì)胞特異標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)進(jìn)行免疫組織化學(xué)雙染色，探討腦損傷后神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性變化情況及其分子生物學(xué)機(jī)制，以期為腦損傷研究提供有益的數(shù)據(jù)材料，也為以上指標(biāo)在法醫(yī)學(xué)實(shí)際檢案的應(yīng)用提供必需理論依據(jù)。 方法 1．大鼠腦損傷落體打擊器的設(shè)計(jì) 本研究設(shè)計(jì)研制了一個(gè)大鼠腦損傷落體打擊模型，打擊裝置由外周導(dǎo) 管、打擊器固定架、擊錘（底部為撞桿）三部分組成，均為不銹鋼材料。外周 導(dǎo)管長(zhǎng)45 cm，外徑1．gcm，內(nèi)徑1．scm，保持每隔＊ 有一氣孔，以防擊錘 下落時(shí)導(dǎo)管內(nèi)空氣阻力的影響。導(dǎo)管下端用一個(gè)可旋轉(zhuǎn)、拆卸的螺扣封閉， 螺扣內(nèi)徑為 1．9 cm。外周導(dǎo)管以?xún)蓚�(gè)可移動(dòng)導(dǎo)管架與打擊器固定架相連， 與水平面垂直。打擊器固定架頂端有兩個(gè)定滑輪，牽拉擊錘上端絲線(xiàn)通過(guò) 兩個(gè)定滑輪，可將擊錘提起，實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)需要在不同高度放開(kāi)絲線(xiàn)，使擊錘 落下。擊錘重”，擊錘底部為撞桿，擊錘直徑＊3cm，撞桿直徑為4nun，撞 桿頭端可超過(guò)導(dǎo)管下端封閉螺扣2．smm。固定裝置由硬水底座、打擊器固 定架、動(dòng)物頭部固定器組成，硬木底座同時(shí)用作動(dòng)物臺(tái)。進(jìn)行打擊時(shí)，，可將 動(dòng)物俯臥位置于硬木底座上，底座兩側(cè)各有四個(gè)動(dòng)物四肢固定器，可根據(jù)動(dòng) 物的大小調(diào)整固定位置。動(dòng)物頭部固定器分左右兩個(gè)，安裝在底座上，可前 后移動(dòng)，每側(cè)又各有一個(gè)可上下活動(dòng)的鈍頭螺栓，可在合適位置固定大鼠頭 部。本實(shí)驗(yàn)選用叨 擊錘從25cm高處下落，沖擊應(yīng)力d為355．09KPa，造 成中度腦損傷，并在傷后不同時(shí)間取材，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。 2．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和動(dòng)物模型制作 隨機(jī)選擇成年健康 SPpe－Dawley雄性大鼠，體重 150－2509，正常對(duì) 照組4只，假手術(shù)組4只，傷后分14組，分別為15、30ndn，l上在＊2h，＼上、 3上5、7、1530d組，每組5只，共計(jì)78只。大鼠稱(chēng)重后，按二班y一劑量用 3％的成巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉，以309重錘從25cm高處下落打擊，致 中度腦損傷。在傷后規(guī)定時(shí)間灌流固定。 3．HE染色 4．電鏡超薄切片制作 5．免疫組織化學(xué)染色 6．免疫組織化學(xué)雙重染色 7．原位雜交染色 8．Wstem Blotting 9．圖像分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用 Metamoroh Imsae System（UIC，美國(guó)）／DP 10／Olympus BX 51 （日本）顯微攝影圖像分析系統(tǒng)，用400倍顯微鏡，在損傷灶周?chē)S機(jī)選5 個(gè)視野，對(duì) MAP－2人一2下DNF人aspase－3免疫組織化學(xué)染色、原位雜 交染色陽(yáng)性反應(yīng)物進(jìn)行定量檢測(cè)，測(cè)定陽(yáng)性反應(yīng)物平均灰度，然后在SPSS ·2· 10．0 for Wndows軟件下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 應(yīng)用上海天能公司 GIS－700D凝膠圖像分析系統(tǒng)對(duì)Western Blotting 后蛋白雜交條帶進(jìn)行掃描，并用腳與正常對(duì)照組密度之比，即相對(duì)密度值 進(jìn)行定量分析。 結(jié) 果 腦損傷的病理形態(tài)學(xué)觀察多時(shí)間段均可見(jiàn)損傷程度近似的大腦皮質(zhì)挫 傷灶，挫傷中心可見(jiàn)腦組織壞死、出血，另外各時(shí)間段均可見(jiàn)不同程度的蛛 網(wǎng)膜下腔出血，損傷lh內(nèi)，損傷灶周?chē)窠?jīng)無(wú)形態(tài)變化不大，傷后12h出現(xiàn) 神經(jīng)元胞體呈三角形，核仁不清，核深染，胞體嗜伊紅性增強(qiáng)，軸突腫脹，尼 氏體溶解消失等神經(jīng)元缺氧性改變；傷后id，神經(jīng)元改變依然存在，但神經(jīng) 膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng)，表現(xiàn)膠質(zhì)結(jié)節(jié)形成、衛(wèi)星現(xiàn)象和噬神經(jīng) 現(xiàn)象等改變更加明顯；傷后3d，格子細(xì)胞即有出現(xiàn)。傷后id，挫傷出血區(qū)細(xì) 胞形態(tài)不規(guī)則，有血紅蛋白析出；傷后3d，挫傷出血區(qū)可見(jiàn)巨噬細(xì)胞吞噬紅 細(xì)胞；到傷后15d，巨噬細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)含鐵血黃素顆粒。 電鏡超微結(jié)構(gòu)改變傷后lh即可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體腫大，部分峙溶 解；傷后3h則有線(xiàn)
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類(lèi)號(hào)】：D919

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2376857