【摘要】： 目的 腦是人體的中樞生命器官，也是暴力損傷中極易受累的器官。顱腦損傷的發(fā)生率及重型顱腦損傷病人的死殘率均甚高。作為法醫(yī)工作者，關心的方面在于影響腦損傷種類、損傷程度的因素，如機械性暴力的大小、作用方向、作用次數(shù)、致傷物的性狀、受傷時的體位及運動狀態(tài)、損傷部位，以及腦損傷后的改變，如腦缺血缺氧、腦水腫、顱內(nèi)壓的變化等。其中損傷后腦組織各種指標的改變與損傷形成時間、損傷程度的關系一直是法醫(yī)工作者潛心研究的重要課題。 本實驗從自行設計大鼠腦損傷落體打擊器開始，先行建立了一個便于觀察和施加處理因素、控制性好、重復性好的動物模型，選用30g擊錘從25cm高處下落，沖擊應力σd為355.09Kpa，打擊大鼠右頂部，造成中等程度的閉合性腦損傷，從病理形態(tài)學、組織超微結(jié)構(gòu)觀察及微管相關蛋白-2(microtubule associated protein 2，MAP-2)、環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase 2，COX-2)、膠質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cell line-derived neutrophic factor，GDNF)、Caspase-3基因及蛋白表達的時間性變化，詳盡系統(tǒng)地闡述腦損傷后各指標變化的時間規(guī)律性及表達差異可能的形成機制。并通過上述指標分別與神經(jīng)元特異性標志物神經(jīng)元核蛋白(neuronal nuclear protein，NeuN)和星形膠質(zhì)細胞特異標志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)進行免疫組織化學雙染色，探討腦損傷后神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞反應性變化情況及其分子生物學機制，以期為腦損傷研究提供有益的數(shù)據(jù)材料，也為以上指標在法醫(yī)學實際檢案的應用提供必需理論依據(jù)。 方法 1．大鼠腦損傷落體打擊器的設計 本研究設計研制了一個大鼠腦損傷落體打擊模型，打擊裝置由外周導 管、打擊器固定架、擊錘（底部為撞桿）三部分組成，均為不銹鋼材料。外周 導管長45 cm，外徑1．gcm，內(nèi)徑1．scm，保持每隔＊ 有一氣孔，以防擊錘 下落時導管內(nèi)空氣阻力的影響。導管下端用一個可旋轉(zhuǎn)、拆卸的螺扣封閉， 螺扣內(nèi)徑為 1．9 cm。外周導管以兩個可移動導管架與打擊器固定架相連， 與水平面垂直。打擊器固定架頂端有兩個定滑輪，牽拉擊錘上端絲線通過 兩個定滑輪，可將擊錘提起，實驗時根據(jù)需要在不同高度放開絲線，使擊錘 落下。擊錘重”，擊錘底部為撞桿，擊錘直徑＊3cm，撞桿直徑為4nun，撞 桿頭端可超過導管下端封閉螺扣2．smm。固定裝置由硬水底座、打擊器固 定架、動物頭部固定器組成，硬木底座同時用作動物臺。進行打擊時，，可將 動物俯臥位置于硬木底座上，底座兩側(cè)各有四個動物四肢固定器，可根據(jù)動 物的大小調(diào)整固定位置。動物頭部固定器分左右兩個，安裝在底座上，可前 后移動，每側(cè)又各有一個可上下活動的鈍頭螺栓，可在合適位置固定大鼠頭 部。本實驗選用叨 擊錘從25cm高處下落，沖擊應力d為355．09KPa，造 成中度腦損傷，并在傷后不同時間取材，進行形態(tài)學觀察。 2．實驗動物分組和動物模型制作 隨機選擇成年健康 SPpe－Dawley雄性大鼠，體重 150－2509，正常對 照組4只，假手術組4只，傷后分14組，分別為15、30ndn，l上在＊2h，＼上、 3上5、7、1530d組，每組5只，共計78只。大鼠稱重后，按二班y一劑量用 3％的成巴比妥鈉腹腔內(nèi)注射麻醉，以309重錘從25cm高處下落打擊，致 中度腦損傷。在傷后規(guī)定時間灌流固定。 3．HE染色 4．電鏡超薄切片制作 5．免疫組織化學染色 6．免疫組織化學雙重染色 7．原位雜交染色 8．Wstem Blotting 9．圖像分析與統(tǒng)計學處理 應用 Metamoroh Imsae System（UIC，美國）／DP 10／Olympus BX 51 （日本）顯微攝影圖像分析系統(tǒng)，用400倍顯微鏡，在損傷灶周圍隨機選5 個視野，對 MAP－2人一2下DNF人aspase－3免疫組織化學染色、原位雜 交染色陽性反應物進行定量檢測，測定陽性反應物平均灰度，然后在SPSS ·2· 10．0 for Wndows軟件下進行統(tǒng)計學處理。 應用上海天能公司 GIS－700D凝膠圖像分析系統(tǒng)對Western Blotting 后蛋白雜交條帶進行掃描，并用腳與正常對照組密度之比，即相對密度值 進行定量分析。 結(jié) 果 腦損傷的病理形態(tài)學觀察多時間段均可見損傷程度近似的大腦皮質(zhì)挫 傷灶，挫傷中心可見腦組織壞死、出血，另外各時間段均可見不同程度的蛛 網(wǎng)膜下腔出血，損傷lh內(nèi)，損傷灶周圍神經(jīng)無形態(tài)變化不大，傷后12h出現(xiàn) 神經(jīng)元胞體呈三角形，核仁不清，核深染，胞體嗜伊紅性增強，軸突腫脹，尼 氏體溶解消失等神經(jīng)元缺氧性改變；傷后id，神經(jīng)元改變依然存在，但神經(jīng) 膠質(zhì)細胞反應隨時間延長逐漸增強，表現(xiàn)膠質(zhì)結(jié)節(jié)形成、衛(wèi)星現(xiàn)象和噬神經(jīng) 現(xiàn)象等改變更加明顯；傷后3d，格子細胞即有出現(xiàn)。傷后id，挫傷出血區(qū)細 胞形態(tài)不規(guī)則，有血紅蛋白析出；傷后3d，挫傷出血區(qū)可見巨噬細胞吞噬紅 細胞；到傷后15d，巨噬細胞內(nèi)可見含鐵血黃素顆粒。 電鏡超微結(jié)構(gòu)改變傷后lh即可見神經(jīng)細胞內(nèi)線粒體腫大，部分峙溶 解；傷后3h則有線
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：D919

【共引文獻】

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本文編號：2376857