【摘要】： 目的DNA降解檢材的檢測(cè)是當(dāng)前法庭科學(xué)面臨的重要挑戰(zhàn)，miniSTR技術(shù)和線粒體DNA檢測(cè)是目前解決這一難題的重要途徑和研究熱點(diǎn)。miniSTR技術(shù)可望顯著提高DNA降解檢材的檢測(cè)成功率，但由于其擴(kuò)增片段大小受限于STR重復(fù)序列的長(zhǎng)度，導(dǎo)致仍有部分嚴(yán)重降解的檢材無(wú)法檢測(cè)；mtDNA檢測(cè)可用于核DNA無(wú)法檢測(cè)的檢材，但尚存在個(gè)人識(shí)別力低的不足。本課題旨在：①建立新的miniSTR熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)，為檢測(cè)降解DNA樣本提供有效手段。②篩選成都漢族群體中具遺傳多態(tài)性的mt-SNP位點(diǎn)，在此基礎(chǔ)上建立多重mt-SNP的微測(cè)序檢測(cè)方法，提高mtDNA的個(gè)人識(shí)別能力，為快速、高通量的mt-SNP檢測(cè)打下基礎(chǔ)。 方法通過(guò)檢索數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出適宜的miniSTR基因座，進(jìn)行群體遺傳學(xué)研究，建立miniSTR熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)，應(yīng)用毛細(xì)管電泳和熒光標(biāo)記自動(dòng)分型系統(tǒng)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。依據(jù)國(guó)際DNA分析技術(shù)工作組(TWGDAM)的指導(dǎo)方案，對(duì)miniSTR復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)的靈敏度、基因座的種屬特異性、案例應(yīng)用、降解模型、陳舊血痕等法醫(yī)學(xué)應(yīng)用進(jìn)行研究。在mt-SNP數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇在其他群體具有多態(tài)性的709、6455、8020、8964、10398、12705、12771、14569、15043等9個(gè)mt-SNP位點(diǎn)，通過(guò)片段長(zhǎng)度差異等位基因特異性PCR(FLDAS-PCR)技術(shù)對(duì)成都漢族群體進(jìn)行了群體遺傳學(xué)研究，獲得具有多態(tài)性的六個(gè)mt-SNP位點(diǎn)，建立相應(yīng)的復(fù)合PCR體系，采用SNaPshot試劑盒進(jìn)行復(fù)合微測(cè)序反應(yīng)并用美國(guó)ABI 310遺傳分析儀進(jìn)行分析檢測(cè)。 結(jié)果成功構(gòu)建了D1S1676、D6S1274和D17S1299的miniSTRs熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)(3plex-miniSTR系統(tǒng))。經(jīng)法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究顯示：3plex-miniSTR系統(tǒng)的檢測(cè)靈敏度為0.5ng模板DNA并有較高的種屬特異性；通過(guò)6個(gè)實(shí)際檢案證明，該體系能用于法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定；通過(guò)對(duì)陳舊血痕和降解模型的研究證明，該體系對(duì)降解檢材有良好的擴(kuò)增效果，較常規(guī)試劑盒擴(kuò)增成功率高，可用于降解樣本的分型。 采用FLDAS-PCR技術(shù)獲得了成都漢族群體9個(gè)mt-SNP位點(diǎn)的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)，在140個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體的樣本中檢出了12種單倍型，單倍型變異度為0.7638。采用SNaPshot試劑盒，，成功地建立了709、6455、10398、12705、14569、15043等6個(gè)mt-SNP位點(diǎn)的復(fù)合擴(kuò)增及復(fù)合微測(cè)序方法。 結(jié)論本課題按照miniSTR引物設(shè)計(jì)策略，成功地構(gòu)建了3個(gè)常染色體miniSTR基因座的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，能夠在激光誘導(dǎo)熒光毛細(xì)管電泳自動(dòng)分型的檢測(cè)平臺(tái)上運(yùn)用，獲得可靠的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。該系統(tǒng)具備了法醫(yī)學(xué)實(shí)踐應(yīng)用的可行性，為分析降解DNA檢材提供了一種有效的新方法。 采用FLDAS-PCR技術(shù)篩選出在成都漢族群體具遺傳多態(tài)性的6個(gè)mt-SNP位點(diǎn)，觀察到12種單倍型，為比較不同群體間的數(shù)據(jù)提供了基礎(chǔ)。采用SNaPshot試劑盒建立了多重mt-SNP的微測(cè)序檢測(cè)方法，可用其對(duì)mtDNA進(jìn)行快速、高通量檢測(cè)，提高了mtDNA的個(gè)人識(shí)別能力，為骨骼、毛發(fā)等樣本的檢測(cè)提供了一種新的檢驗(yàn)途徑，其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用尚需作進(jìn)一步研究。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：D919

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2274419