本文選題：線粒體DNA + 異質(zhì)性　； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：目的：建立變性高效液相色譜法(DHPLC)快速篩選同一個(gè)體不同組織線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)高變區(qū)異質(zhì)型的方法；同時(shí)采用直接測(cè)序法驗(yàn)證其發(fā)生的頻率，為利用mtDNA進(jìn)行法醫(yī)學(xué)鑒定時(shí)作出更加合理的結(jié)果解釋提供參考。 方法：收集尸體18例，，分別提取血、心肌、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰腺、腦組織、肌肉、皮膚、肋骨、指甲及毛發(fā)的mtDNA，共制備樣本234份；并且在本實(shí)驗(yàn)室選取三個(gè)已知序列的樣本Y1、Y2和Y3。在高變區(qū)選取兩個(gè)多態(tài)性較好的區(qū)域即HV Ⅰ：nt16159-16391和HV Ⅱ：nt172-408，選用Gold~(TM) DNA聚合酶分別進(jìn)行擴(kuò)增并且優(yōu)化擴(kuò)增條件。用已知序列的樣本建立兩個(gè)區(qū)域各自最佳的DHPLC檢測(cè)條件；采用DHPLC圖譜和直接正反向測(cè)序法均相同的1#個(gè)體的所有樣本建立篩選不同組織間異質(zhì)型的模型。利用DHPLC篩選異質(zhì)型樣本，篩選出的異質(zhì)型樣本擴(kuò)增更長(zhǎng)的片段(包含目的片段)用ABI 310遺傳分析儀進(jìn)行正反向測(cè)序驗(yàn)證。 結(jié)果：DHPLC的最佳檢測(cè)溫度是HV Ⅰ：59.2℃，HV Ⅱ：55℃。DHPLC共篩選出11例個(gè)體具有異質(zhì)性，而直接測(cè)序法驗(yàn)證只有9例個(gè)體具有異質(zhì)性，其中有4例為點(diǎn)異質(zhì)型，6例為長(zhǎng)度異質(zhì)型，有1例既有點(diǎn)異質(zhì)型又有長(zhǎng)度異質(zhì)型。觀察到異質(zhì)型的個(gè)體中有4例每個(gè)個(gè)體的所有樣本均在相同的位置出現(xiàn)了相同的異質(zhì)型；有2例出現(xiàn)了兩個(gè)堿基位置發(fā)生異質(zhì)性的情況。各種組織出現(xiàn)異質(zhì)型的頻率不完全相同，其范圍在27.8％-44.4％之間，其中肌肉組織出現(xiàn)的異質(zhì)性頻率最高。在所檢出的異質(zhì)性位點(diǎn)中，nt16184-16193和nt303-309的頻率最高。 結(jié)論：DHPLC可快速篩選異質(zhì)性，且經(jīng)濟(jì)、靈敏、自動(dòng)化程度高。隨著篩選技術(shù)和測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展，在mtDNA可檢出的異質(zhì)型越來(lái)越多，這增加了利用mtDNA進(jìn)行法醫(yī)學(xué)鑒定中結(jié)果解釋的難度。因此在法醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域必須擴(kuò)大mtDNA的檢測(cè)范圍以增加個(gè)體識(shí)別能力。
[Abstract]:Objective: to establish a rapid method for screening the heterotypes of mitochondrial DNA(mitochondrial mtDNAs in different tissues of the same body by denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC), and to verify the frequency of its occurrence by direct sequencing. To provide a reference for the use of mtDNA forensic identification to provide a more reasonable interpretation of the results. Methods: the mtDNAs of blood, myocardium, liver, spleen, lung, kidney, pancreas, brain, muscle, skin, rib, nail and hair were collected from 18 cadavers. And the samples of three known sequences, Y1, Y2 and Y3, were selected in our laboratory. Two polymorphic regions, HV 鈪

本文編號(hào)：1965968