發(fā)布時(shí)間：2025-01-07 02:21

　　造血干細(xì)胞（hematopoietic stem cells,HSCs）是所有血液細(xì)胞系的起源細(xì)胞,具有自我更新和持續(xù)增殖能力,擔(dān)負(fù)著維持和重建造血等重要生理功能。造血干細(xì)胞微環(huán)境（Niche）是位于血管周圍靠近骨小梁區(qū),由骨髓間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞組成的維持和調(diào)節(jié)HSCs生理功能的局部組織微環(huán)境。在Niche中,Niche細(xì)胞通過粘附分子和膜表面信號分子來與HSCs直接或間接接觸進(jìn)而調(diào)控HSCs的自我更新、增殖、分化等一系列生物學(xué)行為。本課題通過在基質(zhì)細(xì)胞（OP9）中活化Wnt/β-catenin信號通路,研究Niche中Wnt/β-catenin信號的活化對HSCs自我更新及擴(kuò)增的調(diào)控作用。文章分為四個(gè)部分:（1）四種不同活化型β-catenin蛋白的基質(zhì)細(xì)胞株的建立;（2）體外不同共培養(yǎng)條件下在基質(zhì)細(xì)胞中活化β-catenin對于造血干/祖細(xì)胞的擴(kuò)增影響;（3）基質(zhì)細(xì)胞中活化β-catenin對于小鼠體內(nèi)的造血重建能力的影響;（4）基質(zhì)細(xì)胞中活化β-catenin調(diào)節(jié)造血干/祖細(xì)胞擴(kuò)增的分子機(jī)制。研究結(jié)果如下:1:體外有血清共培養(yǎng)條件下,基質(zhì)細(xì)胞中活化β-catenin信號能夠擴(kuò)...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路概述
        1.1.1 經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路
        1.1.2 非經(jīng)典的Wnt/JNK信號通路和Wnt/Ca²⁺信號通路
    1.2 造血干細(xì)胞概述
    1.3 造血干細(xì)胞與骨髓微環(huán)境
    1.4 骨髓Niche細(xì)胞對造血干細(xì)胞的調(diào)控作用
    1.5 Wnt信號通路對HSCs功能的調(diào)控作用
    1.6 本研究的目的及意義
第2章 不同活化型β-catenin蛋白的OP9細(xì)胞株構(gòu)建
    2.0 前言
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 質(zhì)粒及細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 活化型β-catenin蛋白的OP9細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.2.3 Western-Blot
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 不同活化型β-catenin蛋白的OP9細(xì)胞株的構(gòu)建
        2.3.2 Western-Blot鑒定β-catenin蛋白的表達(dá)
        2.3.3 討論與分析
第3章 基質(zhì)細(xì)胞中過表達(dá)β-catenin蛋白對造血干細(xì)胞體外擴(kuò)增的影響
    3.0 前言
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 小鼠
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
        3.2.2 C57BL/6J小鼠骨髓單細(xì)胞懸液的制備
        3.2.3 臺盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)
        3.2.4 流式抗體染色
        3.2.5 造血干細(xì)胞與OP9體外共培養(yǎng)
        3.2.6 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.7 共培養(yǎng)后的細(xì)胞收集
        3.2.8 流式分析操作
        3.2.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 共培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)圖
        3.3.2 有血清條件下基質(zhì)細(xì)胞中活化β-catenin對于造血干細(xì)胞的體外擴(kuò)增作用
        3.3.3 無血清條件下基質(zhì)細(xì)胞中活化β-catenin對于造血干細(xì)胞的體外擴(kuò)增作用
        3.3.4 無血清條件下基質(zhì)細(xì)胞中活化β-catenin對于克隆形成能力的影響
        3.3.5 討論與分析
第4章 基質(zhì)細(xì)胞中過表達(dá)β-catenin蛋白對小鼠造血重建的影響
    4.0 前言
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 小鼠
        4.1.2 抗體
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 CD45.1小鼠骨髓中單細(xì)胞懸液的制備
        4.2.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4.2.3 流式抗體染色及分析分選
        4.2.4 移植前造血干細(xì)胞與OP9 體外共培養(yǎng)
        4.2.5 體外共培養(yǎng)后細(xì)胞的收集
        4.2.6 競爭性移植實(shí)驗(yàn)
        4.2.7 小鼠骨髓及外周血細(xì)胞采集
        4.2.8 小鼠骨髓及外周血細(xì)胞流式分析
        4.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 有血清條件下基質(zhì)細(xì)胞中過表達(dá)β-catenin對造血重建的影響
        4.3.2 無血清條件下基質(zhì)細(xì)胞中過表達(dá)β-catenin對造血重建的影響
        4.3.3 討論與分析
第5章 β-catenin活化型基質(zhì)細(xì)胞影響造血干細(xì)胞擴(kuò)增的分子機(jī)制的研究
    5.0 前言
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 細(xì)胞
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及耗材
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 造血干細(xì)胞與OP9的非接觸共培養(yǎng)
        5.2.2 共培養(yǎng)后的細(xì)胞收集及流式細(xì)胞染色分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 β-catenin活化型OP9細(xì)胞分泌因子類型的鑒定
        5.3.2 討論與分析
第6章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4024350