造血干細胞（hematopoietic stem cells,HSCs）是所有血液細胞系的起源細胞,具有自我更新和持續(xù)增殖能力,擔負著維持和重建造血等重要生理功能。造血干細胞微環(huán)境（Niche）是位于血管周圍靠近骨小梁區(qū),由骨髓間充質(zhì)基質(zhì)細胞及內(nèi)皮細胞組成的維持和調(diào)節(jié)HSCs生理功能的局部組織微環(huán)境。在Niche中,Niche細胞通過粘附分子和膜表面信號分子來與HSCs直接或間接接觸進而調(diào)控HSCs的自我更新、增殖、分化等一系列生物學行為。本課題通過在基質(zhì)細胞（OP9）中活化Wnt/β-catenin信號通路,研究Niche中Wnt/β-catenin信號的活化對HSCs自我更新及擴增的調(diào)控作用。文章分為四個部分:（1）四種不同活化型β-catenin蛋白的基質(zhì)細胞株的建立;（2）體外不同共培養(yǎng)條件下在基質(zhì)細胞中活化β-catenin對于造血干/祖細胞的擴增影響;（3）基質(zhì)細胞中活化β-catenin對于小鼠體內(nèi)的造血重建能力的影響;（4）基質(zhì)細胞中活化β-catenin調(diào)節(jié)造血干/祖細胞擴增的分子機制。研究結果如下:1:體外有血清共培養(yǎng)條件下,基質(zhì)細胞中活化β-catenin信號能夠擴...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 Wnt信號轉導通路概述
        1.1.1 經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號通路
        1.1.2 非經(jīng)典的Wnt/JNK信號通路和Wnt/Ca²⁺信號通路
    1.2 造血干細胞概述
    1.3 造血干細胞與骨髓微環(huán)境
    1.4 骨髓Niche細胞對造血干細胞的調(diào)控作用
    1.5 Wnt信號通路對HSCs功能的調(diào)控作用
    1.6 本研究的目的及意義
第2章 不同活化型β-catenin蛋白的OP9細胞株構建
    2.0 前言
    2.1 實驗材料
        2.1.1 質(zhì)粒及細胞株
        2.1.2 實驗試劑及耗材
        2.1.3 實驗設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 活化型β-catenin蛋白的OP9細胞株的構建
        2.2.3 Western-Blot
    2.3 實驗結果
        2.3.1 不同活化型β-catenin蛋白的OP9細胞株的構建
        2.3.2 Western-Blot鑒定β-catenin蛋白的表達
        2.3.3 討論與分析
第3章 基質(zhì)細胞中過表達β-catenin蛋白對造血干細胞體外擴增的影響
    3.0 前言
    3.1 實驗材料
        3.1.1 小鼠
        3.1.2 實驗試劑及耗材
        3.1.3 實驗設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 實驗試劑的配制
        3.2.2 C57BL/6J小鼠骨髓單細胞懸液的制備
        3.2.3 臺盼藍染色計數(shù)
        3.2.4 流式抗體染色
        3.2.5 造血干細胞與OP9體外共培養(yǎng)
        3.2.6 細胞形態(tài)學觀察
        3.2.7 共培養(yǎng)后的細胞收集
        3.2.8 流式分析操作
        3.2.9 克隆形成實驗
        3.2.10 統(tǒng)計學分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 共培養(yǎng)細胞形態(tài)圖
        3.3.2 有血清條件下基質(zhì)細胞中活化β-catenin對于造血干細胞的體外擴增作用
        3.3.3 無血清條件下基質(zhì)細胞中活化β-catenin對于造血干細胞的體外擴增作用
        3.3.4 無血清條件下基質(zhì)細胞中活化β-catenin對于克隆形成能力的影響
        3.3.5 討論與分析
第4章 基質(zhì)細胞中過表達β-catenin蛋白對小鼠造血重建的影響
    4.0 前言
    4.1 實驗材料
        4.1.1 小鼠
        4.1.2 抗體
        4.1.3 實驗試劑及耗材
        4.1.4 實驗設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 CD45.1小鼠骨髓中單細胞懸液的制備
        4.2.2 細胞計數(shù)
        4.2.3 流式抗體染色及分析分選
        4.2.4 移植前造血干細胞與OP9 體外共培養(yǎng)
        4.2.5 體外共培養(yǎng)后細胞的收集
        4.2.6 競爭性移植實驗
        4.2.7 小鼠骨髓及外周血細胞采集
        4.2.8 小鼠骨髓及外周血細胞流式分析
        4.2.9 統(tǒng)計學分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 有血清條件下基質(zhì)細胞中過表達β-catenin對造血重建的影響
        4.3.2 無血清條件下基質(zhì)細胞中過表達β-catenin對造血重建的影響
        4.3.3 討論與分析
第5章 β-catenin活化型基質(zhì)細胞影響造血干細胞擴增的分子機制的研究
    5.0 前言
    5.1 實驗材料
        5.1.1 細胞
        5.1.2 實驗試劑及耗材
        5.1.3 實驗設備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 造血干細胞與OP9的非接觸共培養(yǎng)
        5.2.2 共培養(yǎng)后的細胞收集及流式細胞染色分析
    5.3 實驗結果
        5.3.1 β-catenin活化型OP9細胞分泌因子類型的鑒定
        5.3.2 討論與分析
第6章 結論與展望
參考文獻
致謝



本文編號：4024350