木質(zhì)纖維素生物質(zhì)可被纖維素酶降解,降解產(chǎn)生的可發(fā)酵糖經(jīng)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化后可在一定程度上替代利用化石原料生產(chǎn)的燃料及化學(xué)品。目前,纖維素酶使用成本較高,限制了木質(zhì)纖維素的廣泛利用。因此,提高纖維素酶產(chǎn)量、降低纖維素酶生產(chǎn)成本具有重大的應(yīng)用價(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。絲狀真菌纖維素酶基因的表達(dá)主要在轉(zhuǎn)錄水平受到調(diào)控。已有研究表明,多個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子(ClrB、XlnR等正調(diào)控因子,以及CreA、ACEI等負(fù)調(diào)控因子)共同參與其中。構(gòu)建轉(zhuǎn)錄激活因子ClrB的持續(xù)激活突變體以解除纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄對纖維素的依賴性,以及通過分子改造的方式將CreA的轉(zhuǎn)錄阻遏作用轉(zhuǎn)換為轉(zhuǎn)錄激活作用,均有助于提高纖維素酶的合成水平。本論文基于草酸青霉中兩個(gè)關(guān)鍵的纖維素酶轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子ClrB和CreA,構(gòu)建了能夠促進(jìn)纖維素酶基因轉(zhuǎn)錄的人工嵌合轉(zhuǎn)錄因子,并結(jié)合其它改造靶點(diǎn)開展了菌株的組合遺傳改造工作。本論文的主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.基于ClrB DNA結(jié)合域的纖維素酶嵌合轉(zhuǎn)錄激活因子構(gòu)建及功能分析轉(zhuǎn)錄因子ClrB對草酸青霉木質(zhì)纖維素降解酶的表達(dá)具有激活作用,其激活活性需要纖維素的誘導(dǎo)。將ClrB的DNA結(jié)合域分別與草酸青霉中受淀粉誘導(dǎo)的淀...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2一1轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)盒g(shù)C比示意圖

Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｃａｓｓｅｔｔｅ?ｇＣｌｒＢ??ＲＥ－１０菌株的基因組作為擴(kuò)增模板，分別以ＰｇｐｄＡ－Ｆ、ＣｋＢ－ＲＰ為上下増３’端帶有；＾Ｇ同源序列的目的片段／＾＾／／必－７＾；以本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)質(zhì)....

圖２－２嵌合轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)盒ｇＣＸｅ示意圖??Ｆｉ．?２－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｒａｍ?ｏｆ?ｃｈｉｍｅｒｉｃ?ｒｅｕｌａｔｏｒ?ｅｘｒｅｓｓｉｏｎ?ｃａｓｓｅｔｔｅＣＸｃ??

圖２－２嵌合轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)盒ｇＣＸｅ示意圖??Ｆｉｇ．?２－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｃｈｉｍｅｒｉｃ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｃａｓｓｅｔｔｅ?ｇＣＸｃ??以ＲＥ－１０菌株的基因組作為擴(kuò)增模板，分別以ＰｇｐｄＡ－Ｆ、ＣｌｒＢＢＤ－Ｒｘ為上下?....

圖２－３嵌合轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)盒ｇＣＸ示意圖??Ｆｉｇ．?２－３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｃｈｉｍｅｒｉｃ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｃａｓｓｅｔｔｅ?ｇＣＸ??

（２）嵌合轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)盒ｇＣＸｃ的構(gòu)建??Ｐ＾ａ?ｃｌｒＢｓＤ?ｘｌｎＲ－＾＾Ｒｊ＾ＡＤ?ｐｙｒＧ???１．９?ｋｂ?４．４＊ｋｂ???圖２－２嵌合轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)盒ｇＣＸｅ示意圖??Ｆｉｇ．?２－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｃｈｉｍｅｒｉｃ?ｒｅｇｕｌａｔｏｒ?ｅ....

圖２－４嵌合轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)盒ｇＣＡ示意圖??－

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???以ＲＥ－１０菌株的基因組作為擴(kuò)增模板，分別以ＰｇｐｄＡ－Ｆ、ＣｌｒＢＢＤ－Ｒｘ為上下??游引物，擴(kuò)增３’端帶有ｘ／？／？同源序列的目的片段以本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建??保存的質(zhì)粒為模板，分別以ＸｌｎＲ－Ｆ?（ｌｏｎｇ）、ｐｙｒＧ－Ｒ為上下游引物，擴(kuò)增５’端??帶有....

本文編號：4016086