發(fā)光細(xì)菌能夠通過(guò)自身攜帶的lux CDABE基因簇編碼合成熒光素酶及其相應(yīng)的發(fā)光底物而產(chǎn)生獨(dú)特的光信號(hào)。Lux CDABE基因由于其自發(fā)熒光背景低、非破壞、易于檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),已被作為報(bào)告基因用于食品和環(huán)境中各種微生物的模型研究中。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一種條件致病菌,因其具有極強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性,較快的分裂速度,對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境（營(yíng)養(yǎng)、濕度等）的要求較低,在環(huán)境中廣泛分布,會(huì)導(dǎo)致食品腐敗或引起人體中毒等安全問(wèn)題。本研究利用來(lái)源于發(fā)光光桿狀菌（Photobacterium luminescens）的lux CDABE基因簇,構(gòu)建了重組發(fā)光銅綠假單胞菌,之后對(duì)其發(fā)光特性、抑菌評(píng)估和生物膜形成機(jī)理的探究展開(kāi)研究,具體研究結(jié)果如下:（1）本研究基于發(fā)光光桿狀菌的lux CDABE基因,構(gòu)建了兩株可成功表達(dá)生物發(fā)光的重組發(fā)光銅綠假單胞菌:PAO1-CE和PA27853-CE。這兩種重組發(fā)光銅綠假單胞菌發(fā)光的最適溫度為37℃,p H為7.0,Na Cl濃度為1.0 mg/m L。兩種重組發(fā)光銅綠假單胞菌的發(fā)光表達(dá)量傳代穩(wěn)定,且室溫條件下發(fā)光穩(wěn)定。PAO1-CE的發(fā)光表達(dá)量...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1-1已知生物發(fā)光系統(tǒng)的熒光素酶結(jié)構(gòu)

相關(guān)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并揭示了許多生物發(fā)光現(xiàn)象的謎底,同時(shí)也證明了從細(xì)菌到真菌和動(dòng)物,在不同的基因型空間結(jié)構(gòu)上,活的有機(jī)體都可以獲得發(fā)光的能力。各種熒光素(即氧化后易于發(fā)光的小分子,有時(shí)也被統(tǒng)稱為發(fā)光底物)是通過(guò)不同的生化途徑產(chǎn)生的。目前報(bào)道較多的為伴隨著ATP、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(....

圖4-3不同濃度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)對(duì)PAO1-CE的發(fā)光抑制率的影響(EC50:濃度達(dá)到最大效果的50%;Regression:擬合曲線)

六種抗生素Str/Car/Amp/Ter/Tmp/Cip作用24h內(nèi)PAO1-CE的發(fā)光曲線見(jiàn)附錄B。通過(guò)對(duì)比后發(fā)現(xiàn),作用時(shí)間為2h時(shí),隨著Str/Car/Amp/Ter/Tmp/Cip作用濃度的升高,PAO1-CE的IR%也隨之升高。圖4-3以抗生素作用濃度為橫坐標(biāo),PAO....

圖4-4不同濃度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)對(duì)PAO1-CE生長(zhǎng)曲線的影響

圖4-4中展示了P.aeruginosa在含有不同濃度的Str/Car/Amp/Ter/Tmp/Cip的LB培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況,利用修正的Gompertz方程擬合各水平的生長(zhǎng)曲線并表征生長(zhǎng)參數(shù)(表4-5),得出每個(gè)擬合方程的R2均大于0.98,表明該生長(zhǎng)曲線模型可以準(zhǔn)確描述PAO....

圖4-4不同濃度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)對(duì)PAO1-CE生長(zhǎng)曲線的影響

圖4-4不同濃度的Str(A),Car(B),Amp(C),Ter(D),Tmp(E),和Cip(F)對(duì)PAO1-CE生長(zhǎng)曲線的影響4.2.5胞內(nèi)ATP測(cè)定驗(yàn)證PAO1-CE對(duì)六種抗生素的敏感性

本文編號(hào)：4016020