為研究斑馬魚(yú)ngly1基因的功能,我們利用序列比對(duì)、同源建模和系統(tǒng)發(fā)育分析,發(fā)現(xiàn)斑馬魚(yú)Ngly1蛋白與其哺乳動(dòng)物同源物在進(jìn)化上高度保守,并且其三級(jí)結(jié)構(gòu)與小鼠Ngly1十分相似。通過(guò)基因克隆獲得了斑馬魚(yú)ngly1基因的全長(zhǎng)cDNA,轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞后觀察到分子量約98kD的GFP-Ngly1融合蛋白。通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育和不同組織中ngly1的表達(dá)量進(jìn)行分析,結(jié)果顯示斑馬魚(yú)ngly1 mRNA在胚胎發(fā)育的全過(guò)程中都可以檢測(cè)到,包括二細(xì)胞期,24 h,48 h和72 h,并且在胚胎發(fā)育第5天時(shí)達(dá)到高峰。在成魚(yú)中,相比于其他組織,ngly1在卵巢和睪丸中高表達(dá),在肝臟中低表達(dá)。

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圖2ngly1核酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析,

為了研究ngly1的組織分布,從健康斑馬魚(yú)的不同組織中提取總RNA,例如心臟、腮、肝臟、脾臟、腎臟、鰾、眼、腦、卵巢、睪丸、肌肉和腸等,并且通過(guò)qRT-PCR測(cè)定ngly1的轉(zhuǎn)錄水平,先前的研究提示我們應(yīng)謹(jǐn)慎選擇內(nèi)參基因[24]。為了找到適合斑馬魚(yú)組織分布的內(nèi)參基因,通過(guò)qRT-....

本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析鑒定了斑馬魚(yú)ngly1基因與哺乳動(dòng)物的親緣關(guān)系,克隆了斑馬魚(yú)ngly1基因,并且確定了其時(shí)空表達(dá)模式。通過(guò)同源建模及結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)可知,Ngly1蛋白的654個(gè)氨基酸包含三個(gè)結(jié)構(gòu)域:PUG(aa20-81),TGc(aa286-341)和PAW(aa477....

圖3重組Ngly1的表達(dá)圖5胚胎發(fā)育過(guò)程中ngly1基因的時(shí)空表達(dá)

本文編號(hào)：4011608