通過CRISPR/Cas9基因編輯技術,以粳稻品種‘沈農(nóng)265’為遺傳背景對水稻赤霉素2氧化酶基因OsGA2ox10進行編輯,獲得了該基因編碼序列翻譯提前終止純合突變體ga2ox10-1、ga2ox10-2和ga2ox10-3。經(jīng)RT-PCR檢測突變體中OsGA2ox10基因表達量相比野生型極顯著降低。表達模式分析顯示該基因在根、莖、葉、葉鞘、幼穗中均有表達,其中在幼穗中表達量最高。亞細胞定位結(jié)果顯示OsGA2ox10與GFP融合蛋白定位于細胞質(zhì)中。本實驗的開展為進一步明確GA2ox10基因功能和該基因在赤霉素代謝失活調(diào)控網(wǎng)絡中的作用提供了依據(jù)。

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【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 生物信息學分析
        1.1.1 OsGA2ox10基因序列分析
        1.1.2 OsGA2ox家族進化樹構(gòu)建
    1.2 轉(zhuǎn)基因陽性苗檢測及突變方式分析
    1.3 基因組織表達分析
    1.4 OsGA2ox10亞細胞定位結(jié)果分析
2 討論
3 材料與方法
    3.1 供試材料
    3.2 實驗涉及的載體及菌株
    3.3 生物信息學分析及進化樹的構(gòu)建
    3.4 基因編輯特異性靶點的選擇
    3.5 CRISPR/Cas9基因編輯載體的構(gòu)建
    3.6 轉(zhuǎn)基因陽性苗檢測及突變方式分析
    3.7 基因組織表達分析
    3.8 OsGA2ox10亞細胞定位瞬時表達載體的構(gòu)建
    3.9‘沈農(nóng)265’原生質(zhì)體的提取及轉(zhuǎn)化



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