以甘藍(lán)型油菜冬性品種中雙11的基因組為模板,克隆了BnaC05g31880D基因起始密碼子上游-1 525 bp的啟動(dòng)子序列。順式調(diào)控元件的預(yù)測(cè)分析表明,該啟動(dòng)子含有真核生物啟動(dòng)子必需的核心調(diào)控元件TATA box和CAAT box,同時(shí)還存在較多的其他功能元件,如光信號(hào)響應(yīng)調(diào)控元件ATCT-motif、Box 4、ACE、I-box、LAMP-element、TCT-motif,厭氧感應(yīng)必需的順式作用元件ARE,茉莉酸甲酯響應(yīng)順式作用元件CGTCA-motif和TGACG-motif,玉米醇溶蛋白代謝調(diào)控元件O₂-site,赤霉素響應(yīng)元件P-box等。為了驗(yàn)證該啟動(dòng)子的表達(dá)模式,構(gòu)建了由其驅(qū)動(dòng)GUS報(bào)告基因的植物融合表達(dá)載體DX2181G-pBnaC05g31880D,并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序浸染法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥(Col-0)。對(duì)篩選和鑒定的陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行GUS組織化學(xué)法染色,結(jié)果表明,GUS活性在擬南芥的各個(gè)組織中均有較強(qiáng)表達(dá)水平,這表明pBnaC05g31880D具有驅(qū)動(dòng)GUS報(bào)告基因在擬南芥各個(gè)組織中組成型表達(dá)的特性。這為該啟動(dòng)子在油菜轉(zhuǎn)基因提高作物品...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料和試劑
    1.2 目的片段的序列分析
    1.3 目的片段的克隆
    1.4 植物表達(dá)載體構(gòu)建
    1.5 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化及分子鑒定
    1.6 轉(zhuǎn)基因株系的GUS組織化學(xué)染色分析
    1.7 油菜內(nèi)源基因BnaC05g31880D表達(dá)量及轉(zhuǎn)基因擬南芥GUS表達(dá)量檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 BnaC05g31880D基因的啟動(dòng)子序列分析
    2.2 目的片段的克隆
    2.3 載體DX2181G-pBnaC05g31880D的構(gòu)建
    2.4 pBnaC05g31880D啟動(dòng)子的功能分析
    2.5 油菜內(nèi)源基因BnaC05g31880D表達(dá)量分析及轉(zhuǎn)基因擬南芥GUS表達(dá)量分析
3 討論與結(jié)論



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