草酸青霉(Penicillium oxalicum)分泌的纖維素酶組分比里氏木霉(Trichoderma reesei)的更豐富、合理,β-葡萄糖苷酶酶活力更高,已成為生物煉制的研究熱點。草酸青霉菌株HP7-1是本實驗從原始森林篩選出的一株能高效降解木質(zhì)纖維素的絲狀真菌。對P.oxalicum HP7-1基因組和轉(zhuǎn)錄組測定已完成,其纖維素酶表達調(diào)控的機理也得到了一定的揭示。纖維素酶的產(chǎn)生涉及到纖維素的誘導、基因表達調(diào)控、纖維素酶的合成、轉(zhuǎn)運和分泌等諸多方面。轉(zhuǎn)運蛋白在運送可溶性糖進入細胞及形成纖維素誘導信號過程中起到關(guān)鍵作用。對于木質(zhì)纖維素降解真菌而言,糖分子本身既是碳源,又是重要的信號分子,與木質(zhì)纖維素降解酶的誘導表達息息相關(guān)。因此,與纖維素酶合成相關(guān)的膜蛋白特別是糖轉(zhuǎn)運蛋白的研究對進一步認識纖維素的降解利用具有重要意義。本課題首先構(gòu)建了草酸青霉可重復(fù)利用篩選標記PyrG轉(zhuǎn)化系統(tǒng),解決轉(zhuǎn)化系統(tǒng)篩選標記不足的問題,利于對草酸青霉進行基因敲除和遺傳改造。首先,以PyrG缺失菌株△ku70△PyrG-K(以kan為篩選標記敲除了PyrG 基因)為宿主菌,構(gòu)建kan刪除盒(5kan-T-Py...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1一1真菌蛋白分泌示意圖陰Figl一1Di.gr印nofProtdnsecr.tion運加.羅1

廣西大學碩士學位論文?影響草酸青霉纖縫素酶合成的膜蛋白雀？定及其功究??光蛋白（Ｅｎｈａｎｃｅｄ?ｇｒｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ，ＥＧＦＰ）檢測米曲霉中Ｎ－乙基順丁稀二醜亞胺??敏感因子吸附蛋白受體ＳＮＡＲＥ。ＳＮＡＲＳ確保識別的特異性，并介導轉(zhuǎn)運囊泡與靶膜的....

圖２－１葡萄糖標準曲線??Ｆ２－Ｔｈｎｒｒｎｎｒｏｎ

圖２－１葡萄糖標準曲線??Ｆｉｇ?２－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ?ｃａｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??２．２．８．２木糖標準曲線??用去離子水將木糖標準品配置成濃度為１?ｍｇ／ｍＬ的木糖標準溶液，然后將品分別加入到１０?ｍＬ離心管中，混勻后，煮沸１....

圖２－２木糖標準曲線??Ｆｉｇ?２－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｘｙｌｏｓｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??

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圖３－２Ｒ－ｐｙｒＧ篩選標記的使用過程??（Ａ）ｆｃｗ敲除過程示意圖（Ｂ）Ｍ：?１?Ｋｂ?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，?１?：ｐ＞ｒＧ同源左臂，２：篩選標記Ｒ－ｐｙｒＧ，??３為ｐｙｒＧ同源右臂，４：?ｆｏｍ片段敲除盒??

通過ＰＣＲ分別擴增出／＞＊Ｇ基因同源左臂、同源右臂；以質(zhì)粒ｐＲ－ｐｙｒＧ為模板，用引物??ＴＶｐｙｒＧＦ／ＩＶＰｙｒＧＲ?通過?ＰＣＲ?擴增出?ｉ？－／７＿＞ＴＧ（ＴＴｌ－ＰｇｐｄＡ－ｐｙｒＧ－ＴＴ）作為篩選標記，實??驗結(jié)果如圖３－２?Ｂ所示，三個片段大�。校茫覕U增結(jié)果與理論大....

本文編號：3962033