發(fā)布時(shí)間：2024-04-22 06:03

　　草酸青霉(Penicillium oxalicum)分泌的纖維素酶組分比里氏木霉(Trichoderma reesei)的更豐富、合理,β-葡萄糖苷酶酶活力更高,已成為生物煉制的研究熱點(diǎn)。草酸青霉菌株HP7-1是本實(shí)驗(yàn)從原始森林篩選出的一株能高效降解木質(zhì)纖維素的絲狀真菌。對(duì)P.oxalicum HP7-1基因組和轉(zhuǎn)錄組測(cè)定已完成,其纖維素酶表達(dá)調(diào)控的機(jī)理也得到了一定的揭示。纖維素酶的產(chǎn)生涉及到纖維素的誘導(dǎo)、基因表達(dá)調(diào)控、纖維素酶的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌等諸多方面。轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在運(yùn)送可溶性糖進(jìn)入細(xì)胞及形成纖維素誘導(dǎo)信號(hào)過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。對(duì)于木質(zhì)纖維素降解真菌而言,糖分子本身既是碳源,又是重要的信號(hào)分子,與木質(zhì)纖維素降解酶的誘導(dǎo)表達(dá)息息相關(guān)。因此,與纖維素酶合成相關(guān)的膜蛋白特別是糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究對(duì)進(jìn)一步認(rèn)識(shí)纖維素的降解利用具有重要意義。本課題首先構(gòu)建了草酸青霉可重復(fù)利用篩選標(biāo)記PyrG轉(zhuǎn)化系統(tǒng),解決轉(zhuǎn)化系統(tǒng)篩選標(biāo)記不足的問(wèn)題,利于對(duì)草酸青霉進(jìn)行基因敲除和遺傳改造。首先,以PyrG缺失菌株△ku70△PyrG-K(以kan為篩選標(biāo)記敲除了PyrG 基因)為宿主菌,構(gòu)建kan刪除盒(5kan-T-Py...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1一1真菌蛋白分泌示意圖陰Figl一1Di.gr印nofProtdnsecr.tion運(yùn)加.羅1

廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文?影響草酸青霉纖縫素酶合成的膜蛋白雀？定及其功究??光蛋白（Ｅｎｈａｎｃｅｄ?ｇｒｅｅｎ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎ，ＥＧＦＰ）檢測(cè)米曲霉中Ｎ－乙基順丁稀二醜亞胺??敏感因子吸附蛋白受體ＳＮＡＲＥ。ＳＮＡＲＳ確保識(shí)別的特異性，并介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)囊泡與靶膜的....

圖２－１葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)??Ｆ２－Ｔｈｎｒｒｎｎｒｏｎ

圖２－１葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)??Ｆｉｇ?２－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｇｌｕｃｏｓｅ?ｃａｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??２．２．８．２木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)??用去離子水將木糖標(biāo)準(zhǔn)品配置成濃度為１?ｍｇ／ｍＬ的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后將品分別加入到１０?ｍＬ離心管中，混勻后，煮沸１....

圖２－２木糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)??Ｆｉｇ?２－２?Ｔｈｅ?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｘｙｌｏｓｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ??

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圖３－２Ｒ－ｐｙｒＧ篩選標(biāo)記的使用過(guò)程??（Ａ）ｆｃｗ敲除過(guò)程示意圖（Ｂ）Ｍ：?１?Ｋｂ?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ，?１?：ｐ＞ｒＧ同源左臂，２：篩選標(biāo)記Ｒ－ｐｙｒＧ，??３為ｐｙｒＧ同源右臂，４：?ｆｏｍ片段敲除盒??

通過(guò)ＰＣＲ分別擴(kuò)增出／＞＊Ｇ基因同源左臂、同源右臂；以質(zhì)粒ｐＲ－ｐｙｒＧ為模板，用引物??ＴＶｐｙｒＧＦ／ＩＶＰｙｒＧＲ?通過(guò)?ＰＣＲ?擴(kuò)增出?ｉ？－／７＿＞ＴＧ（ＴＴｌ－ＰｇｐｄＡ－ｐｙｒＧ－ＴＴ）作為篩選標(biāo)記，實(shí)??驗(yàn)結(jié)果如圖３－２?Ｂ所示，三個(gè)片段大�。校茫覕U(kuò)增結(jié)果與理論大....

本文編號(hào)：3962033