生殖細(xì)胞的發(fā)生對(duì)機(jī)體的延續(xù)和繁衍起關(guān)鍵作用,是復(fù)雜的分子調(diào)控過程,vasa、nanos和piwi基因是重要的生殖調(diào)控分子,對(duì)生殖細(xì)胞的發(fā)生起調(diào)控作用。與模式生物相比,十足目動(dòng)物生殖調(diào)控的分子機(jī)制仍不清楚,因此,亟待開展十足目生殖基因的功能研究。本論文在前期研究基礎(chǔ)上,以河南華溪蟹(Sinopotamon henanense)為研究對(duì)象,通過Western blot和熒光免疫組織化學(xué)揭示了河南華溪蟹VASA蛋白的表達(dá)模式,結(jié)合RNA干擾技術(shù),對(duì)其功能進(jìn)行了分析,在此基礎(chǔ)上,通過檢測(cè)鎘暴露后vasa基因及其相關(guān)基因的變化,闡明了鎘對(duì)河南華溪蟹生殖調(diào)控的毒性機(jī)制。研究結(jié)果如下:1.河南華溪蟹VASA蛋白的表達(dá)和定位本實(shí)驗(yàn)采用Western blot和熒光免疫組織化學(xué)技術(shù),對(duì)VASA蛋白在河南華溪蟹卵巢發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)和卵母細(xì)胞發(fā)育中的定位情況進(jìn)行了研究。Western blot結(jié)果顯示,隨著卵巢的發(fā)育,VASA蛋白量逐漸升高,大生長(zhǎng)期開始降低,成熟期達(dá)到最低。熒光免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,在卵原細(xì)胞中,VASA蛋白均勻分布于細(xì)胞質(zhì);卵黃發(fā)生早期的卵母細(xì)胞中,大量VASA蛋白在細(xì)胞質(zhì)中分布,少量...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1檢測(cè)不同發(fā)育時(shí)期卵巢組織中VASA蛋白的表達(dá)1：增殖期卵巢；2：小生長(zhǎng)期卵巢；3：大生長(zhǎng)期卵巢；4：成熟期卵巢

次，每次10min。(15)用抗淬滅劑封片，鏡檢。(16)用激光共聚焦顯微鏡觀察。2結(jié)果2.1不同發(fā)育時(shí)期卵巢中VASA蛋白的表達(dá)Westernblot檢測(cè)不同發(fā)育時(shí)期卵巢中VASA蛋白量結(jié)果如圖2.1所示：VASA蛋白在卵巢的不同發(fā)育時(shí)期中均有表達(dá)....

圖2.2熒光免疫組織化學(xué)檢測(cè)VASA蛋白在不同發(fā)育時(shí)期卵母細(xì)胞中的定位A1-J1：VASA蛋白；A2-J2：PI；A3-J3：Merge(VASA蛋白與PI信號(hào)的疊加)；Oo：卵原細(xì)胞；OI和OII：卵黃發(fā)生早期卵母細(xì)胞；OIII和OIV：卵黃發(fā)生中期卵母細(xì)胞；OV和OVI：卵黃發(fā)AC

鎘暴露對(duì)河南華溪蟹vasa及其作用途徑分子的影響16VASAPIMerge圖2.2熒光免疫組織化學(xué)檢測(cè)VASA蛋白在不同發(fā)育時(shí)期卵母細(xì)胞中的定位A1-J1：VASA蛋白；A2-J2：PI；A3-J3：Merge(VASA蛋白與PI信號(hào)的疊加)；Oo：卵原細(xì)胞；OI和OII：卵黃發(fā)....

圖3.1Westernblot檢測(cè)不同鎘濃度暴露后VASA蛋白在不同發(fā)育時(shí)期表達(dá)量的變化

第三章鎘暴露對(duì)河南華溪蟹VASA蛋白的影響212結(jié)果2.1鎘暴露對(duì)各發(fā)育時(shí)期卵巢VASA蛋白表達(dá)量的影響不同鎘濃度暴露后，各個(gè)發(fā)育時(shí)期卵巢中VASA蛋白的表達(dá)規(guī)律各不相同。結(jié)果顯示：如圖3.1A和B所示，隨著鎘濃度的升高，增殖期和小生長(zhǎng)期的卵巢VASA蛋白量呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢(shì)；....

圖4.1河南華溪蟹nanos1、nanos2和piwi基因的克隆A：河南華溪蟹nanos2基因；M：DNAmarker;1和2：nanos2

溪蟹nanos1、nanos2、piwi基因在體內(nèi)不同組織和不同發(fā)育時(shí)期卵巢中的表達(dá)情況。分別以卵巢、精巢、副性腺、鰓、心、肝胰腺、腸、胃、肌肉組織cDNA為模板，和以增殖期、小生長(zhǎng)期、大生長(zhǎng)期、成熟期的卵巢cDNA為模板，以nanos1-F/R、nanos1-F/R、piwi-....

本文編號(hào)：3961297