近年來,國際上關于非O157大腸桿菌,尤其是“big six”暴發(fā)流行的報道逐漸增多,已成為重要的食源性致病菌之一。食品加工及貯藏過程中,各種柵欄因子聯(lián)合應用可對有害菌產生抑制甚至殺滅效應,但越來越多的研究發(fā)現(xiàn)它們有可能產生交叉保護作用,提高細菌的存活率,反而增大了食品風險。非O157大腸桿菌與O157相似,也具有較強耐酸性,目前關于熱休克-酸應激對非O157大腸桿菌存活的影響,尤其是應激過程中應激基因、毒力基因表達的動態(tài)變化方面的研究少見報道。因此,本文首先調查牛糞和牛肉樣本中非O157大腸桿菌的污染情況,并以最主要的血清型O26為對象進行鹽酸乳酸耐受性比較;進一步選取乳酸耐受性不同的有毒菌株和無毒菌株,研究熱休克-酸應激下菌株的存活、毒力基因表達的變化,以探討熱休克/酸適應與酸應激的聯(lián)合效應;進而從細菌膜脂肪酸組成和應激基因的變化來研究熱休克-酸應激時大腸桿菌O26的應激響應機制。1、牛源性大腸桿菌非O157的分離鑒定參考USDA檢測方法,對樣品進行選擇性增菌,用多重PCR方法進行初步篩選,檢測O抗原(O157、O121、O111、O103、O26),陽性樣本用選擇性顯色培養(yǎng)基Ra...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 致病性大腸桿菌
        1.1.1 O157 STEC與非O157 STEC
        1.1.2 STEC生物學特性
        1.1.3 “big six”非O157 STEC的流行情況
    1.2 非O157 STEC毒力因子及致病機制
        1.2.1 志賀毒素
        1.2.2 黏附素
        1.2.3 腸溶血素
        1.2.4 細胞致死腫脹毒素
    1.3 應激與STEC應激響應
        1.3.1 酸應激對非O157 STEC的影響
        1.3.2 溫度對非O157 STEC的影響
        1.3.3 多種應激聯(lián)合對非O157 STEC的影響
        1.3.4 應激與毒力基因
    1.4 存在問題及本研究意義
    1.5 本課題技術路線
第2章 牛源性非O157大腸桿菌的分離與鑒定
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌種與試劑
        2.1.2 儀器與設備
        2.1.3 方法
    2.2 結果與分析
        2.2.1 樣品O血清型檢測結果
        2.2.2 菌株O血清型檢測結果
        2.2.3 菌株鞭毛抗原分型
        2.2.4 毒力基因檢測結果
    2.3 討論
    2.4 本章小結
第3章 熱休克-酸應激對大腸桿菌O26存活及其毒力基因表達的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 菌株與試劑
        3.1.2 儀器與設備
        3.1.3 大腸桿菌O26酸耐受試驗
        3.1.4 大腸桿菌O26熱休克-酸應激試驗
        3.1.5 熱休克-酸應激對大腸桿菌O26毒力基因表達的影響
        3.1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    3.2 結果與分析
        3.2.1 大腸桿菌O26耐酸性比較試驗結果
        3.2.2 熱休克-酸應激存活菌數(shù)檢測結果
        3.2.3 內參基因篩選
        3.2.4 毒力基因表達
    3.3 討論
    3.4 本章小結
第4章 熱休克-酸應激對大腸桿菌O26膜脂肪酸的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 菌株與試劑
        4.1.2 儀器與設備
        4.1.3 實驗方法
        4.1.4 統(tǒng)計分析
    4.2 結果與分析
        4.2.1 菌株S433細胞膜脂肪酸組成的變化
        4.2.2 菌株G13Z1膜脂肪酸組成的變化
        4.2.3 菌株110Z4膜脂肪酸組成的變化
    4.3 討論
    4.4 本章小結
第5章 熱休克-酸應激對大腸桿菌O26相關基因表達的影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 菌種與試劑
        5.1.2 儀器與設備
        5.1.3 實驗方法
        5.1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    5.2 結果與分析
        5.2.1 一般應激基因表達
        5.2.2 酸應激相關基因表達
        5.2.3 熱應激基因表達
    5.3 討論
    5.4 本章小結
全文結論
論文創(chuàng)新點
工作展望
參考文獻
在讀期間發(fā)表的學術論文及研究成果
致謝



本文編號：3949848