芒(Miscanthus sinensis)隸屬于多年生高大禾草——芒屬(Miscanthus),其生態(tài)效應(yīng)和經(jīng)濟(jì)效益?zhèn)涫車鴥?nèi)外研究者的關(guān)注,是中國廣闊邊際土地種植與利用的能源植物。為獲得芒的轉(zhuǎn)基因株系,同時(shí)對MINAC2基因在鹽脅迫下的表達(dá)特征進(jìn)行研究,本研究利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將MINAC2基因?qū)朊⒌幕蚪M,并采用RT-qPCR技術(shù)測定了0.6%Na Cl溶液脅迫下轉(zhuǎn)基因株系0、1 h、3 h、9 h、12 h、24 h、48 h的MINAC2相對表達(dá)量。獲得的主要研究結(jié)果如下:(1)經(jīng)PCR鑒定確定了轉(zhuǎn)MINAC2基因陽性株系;(2)未經(jīng)NaCl脅迫時(shí)轉(zhuǎn)MINAC2基因株系的表達(dá)量顯著低于對照組,然而在0.6%NaCl處理達(dá)到一定時(shí)長后轉(zhuǎn)MINAC2基因株系的表達(dá)量是顯著高于對照組(p<0.05),為對照組的5.93倍。通過本研究,建立了芒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系,并對MINAC2基因在芒的耐鹽能力提高中所起的作用進(jìn)行了初步探討。

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【部分圖文】：

圖1MINAC2基因的遺傳轉(zhuǎn)化

通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)芒屬植物的遺傳轉(zhuǎn)化，大部分愈傷組織在含Basta和Cef的培養(yǎng)基上出現(xiàn)褐化、死亡，只有少部分愈傷組織能正常分化成苗，但其生長緩慢，最終獲得抗性轉(zhuǎn)化株經(jīng)煉苗后移栽入土(圖1)。1.2轉(zhuǎn)基因植株Bar基因和35S-MINAC2基因的PCR檢測

圖2轉(zhuǎn)化株P(guān)CR產(chǎn)物電泳

根據(jù)吉璐等(2015)研究結(jié)果，選取0.6%濃度NaCl進(jìn)行處理，采用RT-qPCR技術(shù)，以不同脅迫時(shí)長對照植株的基因表達(dá)量為對照，相對標(biāo)準(zhǔn)值設(shè)為1，測得不同脅迫時(shí)長下轉(zhuǎn)基因株系和對照植株的MINAC2表達(dá)水平。結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)MINAC2基因株系在0h時(shí)MI-NAC2表達(dá)量與對照....

圖30.6%NaCl脅迫的不同時(shí)間下轉(zhuǎn)基因株系和對照植株的MINAC2基因表達(dá)水平

國內(nèi)外的研究和本試驗(yàn)的結(jié)果表明，芒的抗鹽性水平普遍較高(宗俊勤等,2011)，要進(jìn)一步提高芒的抗鹽性，關(guān)鍵是要通過大量的資源收集，篩選出抗性強(qiáng)的資源，通過雜交手段篩選出價(jià)值高的資源，而通過轉(zhuǎn)基因手段選育抗性強(qiáng)、利用價(jià)值高的新品系只是一條可能的途徑。吉璐(2013)的試驗(yàn)結(jié)果顯示，....

圖4載體pEarelyGate100-MINAC2的T-DNA區(qū)結(jié)構(gòu)

MS+2mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA+0.2g/LCA(檸檬酸)+8g/L瓊脂粉+30g/L蔗糖，轉(zhuǎn)化階段在培養(yǎng)基中加入一定濃度Cef、Basta作為篩選劑。3.4細(xì)菌培養(yǎng)基及試劑

本文編號：3949171