[目的]器官移植術(shù)后需要使用廣譜免疫抑制劑治療器官移植術(shù)后免疫排斥,尋求一種可替代或減少免疫抑制劑使用或增加免疫靶向性的方法。課題結(jié)合轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming Growth Factor β1,TGF-β1)的免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)作用與間充質(zhì)干細(xì)胞的低免疫原性、免疫抑制性的特性,構(gòu)建比格犬TGF-β1基因過表達(dá)慢病毒載體,轉(zhuǎn)染比格犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Canine mesenchymal stem cells,cMSCs)并進(jìn)行鑒定。[方法]1、采用OligoMix(?)寡核苷酸合成法得到全基因,PCR進(jìn)行比格犬TGF-β1目的基因純化,瓊脂糖電泳回收并鑒定目的基因片段。以獲取的目的基因(犬)TGF-β 1 與慢病毒載體利用 ClonExpress(?)Entry One Step Cloning Kit 將兩者連接構(gòu)建攜帶目的基因的LV5載體。培養(yǎng)制備以大腸桿菌為媒介的感受態(tài)細(xì)胞,以氯化鈣法完成菌懸液轉(zhuǎn)染感受態(tài)細(xì)胞。抽提質(zhì)粒行雙酶切鑒定,并將陽性克隆與目的基因(犬)TGF-β 1進(jìn)行測序比對,用于后續(xù)實驗。2、首先選用購進(jìn)的293T細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇、計數(shù)、傳代、凍存。...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 Foxp3在免疫耐受平衡中的相關(guān)作用機制
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果
致謝



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