發(fā)布時(shí)間：2024-03-30 12:43

　　脂肪酶(EC3.11)作為綠色生物催化劑,廣泛應(yīng)用于生物制藥、食品加工、化學(xué)分析等領(lǐng)域。固定化為提升酶重用性及穩(wěn)定性提供了一種有效的解決途徑,而以磁性納米粒子為固定化載體可以更為方便快捷地回收酶。本文圍繞磁性納米粒子,制備出三種復(fù)合載體,包括化學(xué)共沉淀法制備得到磁性氧化石墨納米復(fù)合物(MGO)、表面活性劑改性磁性氧化石墨烯(SMGO)和表面活性劑改性Fe304磁性納米粒子(Span/Tween Fe304),探討三種載體用于褶皺假絲酵母脂肪酶(CRL)的固定化效果,并重點(diǎn)研究表面活性劑改性載體對(duì)脂肪酶催化特性的影響。采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)MGO載體的制備進(jìn)行優(yōu)化,以酶活與比活為考察指標(biāo),得到MGO的最佳制備工藝。傅里葉紅外光譜(FT-IR)與掃描電鏡(SEM)表征分析表明MGO制備成功,GO表層的羧基官能團(tuán)在強(qiáng)堿條件下被部分還原,導(dǎo)致MGO表面羧基含量明顯減少。在最優(yōu)固定化條件下,固定化酶活力回收率及蛋白回收率分別為92.41%、88.2%。固定化酶重復(fù)利用第二次相對(duì)酶活下降至40%左右,推測(cè)MGO載體上固定的脂肪酶大部分為物理吸附,極少部分為共價(jià)固定。采用化學(xué)共沉淀法制備MGO,直接在反應(yīng)體...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１洋蔥伯克霍爾德氏菌脂肪酶（ＢＣＬ）結(jié)構(gòu)色帶示意圖［１６］?（ｐ帶用箭頭和螺旋線圈表示，蓋子??（１１８－１５９）為紅色螺旋，面向蓋子的子域（２１４－２６１）為藍(lán)色，Ｃａ２＿由球形表示，催化三聯(lián)體（Ｓ８７，??Ｄ２６４和Ｈ２８６）和氨基酸殘基用球棍表示??

研宄人員通過對(duì)多種脂肪酶全尺寸３Ｄ結(jié)構(gòu)的研究，發(fā)現(xiàn)不同來源的脂肪??酶雖然會(huì)在尺寸大小及氨基酸序列上存在差異，但它們均擁有類似的結(jié)構(gòu)基序，即ａ／ｐ??水解酶折疊。其核心由五個(gè)及以上類似的Ｐ帶構(gòu)成，側(cè)翼為ａ螺旋。其結(jié)構(gòu)如圖１－１所示。??脂肪酶的活性中心包含三個(gè)氨基酸殘基，分別為絲....

圖１－２酶的固定化方法??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍｅｔｈｏｄｓ?ｆｏｒ?ｅｎｚｙｍｅ?ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ＾９］??

??固定化方式是影響固定化酶催化特性的主要因素之一１１７１。固定化方式有多種，按照??人類來分有化‘７：法和物理法（圖１－２所示）。吸附法和包埋法均屬于物理法．前者是指??將＿勾各類載體材料或者吸附劑在溫和條件下直接接觸，酶通過氫鍵、范德華力、靜電??相互作用或疏水相互作用吸附在....

圖１－４氧化石墨烯結(jié)構(gòu)??－

氧化石墨烯（ＧＯ）為新型二維（２Ｄ）納米材料，具有優(yōu)異的物理化學(xué)性能，在氧??化石墨烯結(jié)構(gòu)中，其邊緣和褶皺處多為羧基，片層表面上的官能團(tuán)主要為羥基和環(huán)氧基。??其結(jié)構(gòu)如圖１－４所示。氧化石墨烯被廣泛應(yīng)用于納米載體的研究，可應(yīng)用于多種生物活??性物質(zhì)，進(jìn)而開發(fā)新型生物催化劑、生物傳....

圖２－３磁性氧化石墨烯固定化酶分散液（ａ）；固定化酶液在外部磁場(chǎng)作用２ｍｉｎ（ｂ）??Ｆｉｇ．?２－３?Ｔｈｅ?ｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ?ｌｉｑｕｉｄ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｍａｇｎｅｔｉｃ?ｇｒａｐＨｅｎｅ?ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ?ｅｎｚｙｍｅ?（ａ）；??

碩士學(xué)位論文磁納米子對(duì)脂？肪酶ＣＲＬ的固定化??圖２－２〇〇（０．５尺）、？６３〇４（２１〇、１＾〇〇（２｛（：，８幻８￡１＾圖??Ｆｉｇ?２－２?ＧＯ、Ｆｅ３〇４、ＭＧＯ?Ｓｃａｎｎｉｎｇ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ。??屬屬：：：丨??＿：：：．１：．＿｜難??圖....

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