目的:研究不同類型巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎性微環(huán)境對(duì)脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)增殖和分化的影響。方法:利用M1、M2型巨噬細(xì)胞條件培養(yǎng)基(conditioned media,CMs)模擬不同的炎性微環(huán)境。分別在不同環(huán)境下(CM1組、CM2組以及Norm組)培養(yǎng)并誘導(dǎo)ADSCs。利用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,茜素紅染色、油紅O染色以及RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞成骨或成脂情況。結(jié)果:CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示CM1組ADSCs增殖能力強(qiáng)于其他兩組;茜素紅染色及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示CM2可顯著提高ADSCs成骨能力;油紅O染色及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示CM1可顯著提高ADSCs成脂能力。結(jié)論:CM1可以增強(qiáng)ADSCs的增殖和脂肪形成能力,CM2對(duì)ADSCs的成骨分化有顯著促進(jìn)作用。

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圖1巨噬細(xì)胞表型鑒定

表1RT-PCR引物序列Tab1PrimersequencesforRT-PCR基因名稱引物序列(5’-3’)大小(bp)RUNX2正向:TCTTCCAAAGCCAGAGCG18反向:TGCCATTGAGGTGGTCG17OCN正向:CA....

圖2不同類型巨噬細(xì)胞表型鑒定

免疫熒光染色結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞極化后形態(tài)發(fā)生變化,向M1型極化的巨噬細(xì)胞呈“煎蛋樣”,偽足較短(圖2A);而向M2型極化巨噬細(xì)胞偽足較細(xì)長(zhǎng),呈“細(xì)長(zhǎng)紡錘樣”[13](圖2C)。流式細(xì)胞術(shù)分析顯示F4/80+細(xì)胞中CD86+的比例約為90.7%(圖2B);F4/80+細(xì)胞中CD....

圖33組ADSCs增殖曲線

圖2不同類型巨噬細(xì)胞表型鑒定2.3ADSCs增殖的檢測(cè)

圖43組ADSCs成骨誘導(dǎo)后茜素紅染色以及半定量分析結(jié)果

油紅O染色結(jié)果及半定量分析顯示成脂誘導(dǎo)14d后CM1組中的ADSCs相比其他2組產(chǎn)生了更多的脂滴(P<0.05)(圖6)。RT-PCR分析顯示,CM1組PPAR-γ、C/EBPαmRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯高于其他2組(P<0.01)。PPAR-γ相對(duì)表達(dá)量Norm組....

本文編號(hào)：3937010