肝臟是調(diào)節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)的重要器官。在饑餓過程中,低血糖可以促進(jìn)胰島α細(xì)胞分泌胰高血糖素,胰高血糖素結(jié)合肝臟上的胰高血糖素受體,促進(jìn)肝糖原分解,增加糖異生作用從而穩(wěn)定血糖。肥胖和2型糖尿病患者表現(xiàn)為胰高血糖素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)以及肝臟糖異生增加,但是,這背后的詳細(xì)機(jī)制并不完全清楚。Purβ是一種富嘌呤元素結(jié)合蛋白,可與富含嘌呤的單鏈或雙鏈DNA或RNA結(jié)合,近年來Purβ的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能漸漸被挖掘。Purβ是否調(diào)節(jié)肝臟糖代謝還不清楚。本論文深入研究了Purβ調(diào)控肝臟糖代謝的分子機(jī)制,其主要發(fā)現(xiàn)如下:1.在饑餓或胰高血糖素誘導(dǎo)下,PurβmRNA與蛋白水平顯著升高,提示Purβ極有可能參與葡萄糖代謝。從C57 BL/6小鼠分離原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞,利用高表達(dá)與shRNA腺病毒載體在肝細(xì)胞中高表達(dá)或敲低Purβ,進(jìn)行糖異生實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示Purβ的高表達(dá)可以促進(jìn)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞糖異生作用,敲低Purβ可以抑制細(xì)胞糖異生作用。在db/db小鼠肝臟中特異性敲低Purβ顯著降低了db/db小鼠高血糖,并且緩解了db/db小鼠的糖耐量損傷,說明Purβ是一種可以調(diào)節(jié)糖代謝的關(guān)鍵分子。2.高表達(dá)或敲低Purβ沒有改變胰島素誘...

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文對照表
第一章 引言
    1.1 肝臟糖代謝研究進(jìn)展
        1.1.1 肝臟糖代謝過程
        1.1.2 肝臟糖代謝與糖尿病
        1.1.3 肝臟糖代謝作用機(jī)制研究進(jìn)展
        1.1.4 cAMP調(diào)控機(jī)制
    1.2 Purβ研究進(jìn)展
        1.2.1 Pur蛋白家族研究進(jìn)展
        1.2.2 Purβ結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能
    1.3 研究目的與意義
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 研究意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及肝臟組織樣品
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)藥品及耗材
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑配制
        2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.6 引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的分離及培養(yǎng)
        2.2.2 傳代細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 RNA-seq
        2.2.4 小鼠肝組織及細(xì)胞總蛋白提取
        2.2.5 Western blot
        2.2.6 主要?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)
        2.2.7 RT-PCR
        2.2.8 熒光定量PCR
        2.2.9 瓊脂糖凝膠電泳與膠回收
        2.2.10 感受態(tài)的制備
        2.2.11 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.2.12 腺病毒包裝
        2.2.13 腺病毒純化
        2.2.14 shRNA載體構(gòu)建
        2.2.15 體外糖異生
        2.2.16 PEI轉(zhuǎn)染
        2.2.17 熒光素酶雙報(bào)告基因檢測
        2.2.18 肝臟糖原檢測
        2.2.19 ELISA
        2.2.20 Nuclear run on RT-qPCR assay
        2.2.21 Chromatin immunoprecipitation(ChIP)assays
        2.2.22 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 Purβ促進(jìn)肝細(xì)胞產(chǎn)糖
        3.1.1 饑餓與胰高血糖素處理可誘導(dǎo)Purβ表達(dá)
        3.1.2 Purβ促進(jìn)糖異生
    3.2 肝臟特異性敲低Purβ可以緩解肥胖小鼠中的高血糖和糖耐量損傷
        3.2.1 肥胖小鼠肝臟中Purβ表達(dá)異常升高
        3.2.2 肝臟特異性敲低Purβ可以緩解肥胖小鼠的高血糖
        3.2.3 肝臟特異性敲低Purβ可降低肥胖小鼠血漿胰島素水平
        3.2.4 肝臟特異性敲低Purβ可以緩解肥胖小鼠中的糖耐量損傷
    3.3 Purβ未調(diào)節(jié)肝胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、肝臟糖原水平、脂肪變性或炎癥
        3.3.1 Purβ調(diào)節(jié)血糖不依賴于胰島素敏感性
        3.3.2 肝臟特異性敲低Purβ不影響肥胖小鼠肝臟糖原水平
        3.3.3 肝臟特異性敲低Purβ不調(diào)節(jié)肥胖小鼠脂肪變性與炎癥
    3.4 Purβ可調(diào)節(jié)肝臟胰高血糖素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        3.4.1 肝臟特異性敲低Purβ可降低胰高血糖素敏感性與糖異生
        3.4.2 Purβ可調(diào)節(jié)CREB磷酸化水平
        3.4.3 Purβ 調(diào)控肝臟糖異生相關(guān)基因表達(dá)
    3.5 Purβ促進(jìn)肝cAMP生成以及增強(qiáng)PKA活性
        3.5.1 Purβ可促進(jìn)肝cAMP生成
        3.5.2 Purβ可增強(qiáng)PKA活性
    3.6 Purβ促進(jìn)Adcy6 表達(dá)
        3.6.1 Purβ對 PDEs與 Adcys的表達(dá)調(diào)控
        3.6.2 Purβ促進(jìn)Adcy6 mRNA轉(zhuǎn)錄與蛋白表達(dá)
        3.6.3 Adcy6可被饑餓與胰高血糖素處理所誘導(dǎo)
    3.7 Purβ可直接結(jié)合到Adcy6 啟動(dòng)子并增加其轉(zhuǎn)錄
        3.7.1 Purβ對 Adcy6 轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控
        3.7.2 Purβ與 Adcy6 啟動(dòng)子的結(jié)合區(qū)域
    3.8 總結(jié)
第四章 討論
主要結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3935104