醛基是DNA中天然核苷酸修飾的重要基團(tuán),在表觀遺傳學(xué)的研究中具有重要意義。這些醛基修飾堿基包括5-醛基胞嘧啶(5fC),5-醛基尿嘧啶(5fU),脫堿基位點(diǎn)(AP),它們?cè)谡婧松锖驮松锏幕虮磉_(dá)調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用,并且修飾水平與某些疾病密切相關(guān)。5fC,5fU,AP三者之間存在某些聯(lián)系,比如參與DNA的主動(dòng)去甲基化、改變DNA的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性從而造成DNA損傷,與蛋白質(zhì)發(fā)生作用形成DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)物等,因此,本論文以三種堿基為共同研究對(duì)象,致力于用小分子熒光探針同時(shí)標(biāo)記和檢測(cè)它們。本論文設(shè)計(jì)并合成了萘酰胺-羥胺和萘酰胺-乙二胺兩種探針,通過(guò)分別比較兩者與三種不同含有醛基的堿基單體反應(yīng)的活性和穩(wěn)定性,最終選定萘酰胺-羥胺為較佳的探針。本論文用該探針首次選擇性標(biāo)記了DNA中含有的全部天然醛基包括5fC、5fU和AP,而該探針對(duì)其他基團(tuán)如羥甲基,甲基等修飾的堿基不起作用,表明了探針?lè)肿訉?duì)醛基的高度特異性。本論文詳細(xì)研究了產(chǎn)物的熒光特性,討論了羥胺對(duì)DNA中醛基的反應(yīng)活性,為設(shè)計(jì)選擇性標(biāo)記修飾DNA的化合物提供了重要參考,期望未來(lái)本論文設(shè)計(jì)的探針能用于活體內(nèi)醛基的定量檢測(cè)。

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-2TET和TDG酶參與的DNA的主動(dòng)去甲基化過(guò)程

DNA醛基修飾的選擇性熒光標(biāo)記研究它們可能是額外的表觀遺傳標(biāo)記，能夠?qū)虮磉_(dá)5mC的氧化形式中，5fC尤為突出，因?yàn)樗幸粌?nèi)潛在的親核試劑具有反應(yīng)活性，如氨基酸、多肽和比，最近的蛋白質(zhì)組學(xué)研究已經(jīng)確定了一些核蛋這導(dǎo)致我們假設(shè)5fC的醛基基團(tuán)能夠與DNA結(jié)NA-蛋....

圖1-35fC與核小體組蛋白作用形成可修復(fù)的DNA-蛋白交聯(lián)物（DPCs）

學(xué)和表觀遺傳調(diào)控中發(fā)揮作用。反過(guò)來(lái)，5fC介導(dǎo)的DN通過(guò)干擾DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和修復(fù)來(lái)危害基因穩(wěn)定性。圖1-2TET和TDG酶參與的DNA的主動(dòng)去甲基化過(guò)程[7]。

圖1-6AP與核小體組蛋白尾部賴(lài)氨酸的氨基作用引起DNA鏈斷裂過(guò)程示意圖

武漢大學(xué)碩士學(xué)位論文復(fù)過(guò)程中作為一種短暫的中間物外，還有越下游生物機(jī)制和途徑。例如，AP位點(diǎn)的形成，G-四鏈體中存在的氧化損傷位點(diǎn)8oxoG引起要進(jìn)一步的調(diào)查，以確定這一修飾的真正意調(diào)控中起關(guān)鍵作用。另外，有研究表明，在染賴(lài)氨酸的氨基作用形成席夫堿，然后經(jīng)過(guò)β消），并....

圖1-75fC的三種檢測(cè)方法

(1)使用適當(dāng)?shù)脑噭┻M(jìn)行化學(xué)標(biāo)記，提熒光檢測(cè)；(3)親和性富集，隨后消化和ESI-MS或擴(kuò)質(zhì)聯(lián)用的檢測(cè)方法有一種基于質(zhì)譜的技術(shù)可以做到直接測(cè)量長(zhǎng)片態(tài)下難以進(jìn)入氣相的壓力狀態(tài)，不能滿(mǎn)足MSI-TOF質(zhì)譜可以檢測(cè)到聚核苷酸（高達(dá)100個(gè)酸（10-100μM）才能被檢測(cè)....

本文編號(hào)：3934690