為了探索白腐菌偏腫革裥菌降解染料茜素紅過程中的生理機(jī)制和差異表達(dá)基因,在LNAS培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌株,以添加茜素紅為處理組,加入無菌水為對照組,采用抑制性消減雜交方法構(gòu)建了在染料降解過程中的差異基因cDNA文庫。經(jīng)過2次差減雜交后所得的陽性克隆,除去重復(fù)序列后得到75個(gè)獨(dú)立基因的ESTs序列,即為差異基因的SSH-cDNA文庫。文庫中顯著表達(dá)的差異基因主要有編碼谷氨酰胺合成酶、熱激蛋白70、ɑ,β-水解酶、脯氨酰氨肽酶-2、MFS普通基質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、鈣網(wǎng)結(jié)構(gòu)域蛋白、20S蛋白酶體亞基α型3、3-脫氧-7-磷酸庚酮糖合酶、醛酮還原酶、脂肪酸2-羥化酶、輔酶Ⅰ黃素氧化還原酶、細(xì)胞色素P450等基因,這些差異基因及其產(chǎn)物參加了茜素紅的氧化降解反應(yīng)、糖類和蛋白質(zhì)的降解作用、應(yīng)激反應(yīng)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。此研究結(jié)果可為進(jìn)一步篩選偏腫革裥菌中與染料降解性狀相關(guān)的基因奠定基礎(chǔ)。

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【部分圖文】：

圖4主要差異表達(dá)基因GO功能分類表達(dá)譜

差異表達(dá)的基因及其產(chǎn)物:對SSH-cDNA文庫的基因進(jìn)行功能注釋與BLASTx比對,從中篩選到46個(gè)差異表達(dá)的已知功能的基因(表2),這些篩選出來的基因包括參與氧化還原過程的相關(guān)基因、水解酶基因、轉(zhuǎn)移酶基因、水合酶基因、合成酶與連接酶基因,還有編碼熱激蛋白、核糖體蛋白、翻譯延伸因....

圖5高同源性基因種類分布

ESTs基因產(chǎn)物高同源性擔(dān)子菌分析:運(yùn)用Blast2GO軟件對茜素紅脫色過程中的差異表達(dá)基因氨基酸序列進(jìn)行高同源性比較,結(jié)果表明,偏腫革裥菌SSH-cDNA文庫的氨基酸序列主要與如下幾種擔(dān)子菌的氨基酸序列具有高同源性。同源性由高到低依次為云芝栓菌(Trametesversico....

圖3陽性克隆菌液PCR驗(yàn)證結(jié)果電泳圖

對所得的陽性克隆白色單菌落,隨機(jī)挑出72個(gè)克隆進(jìn)行擴(kuò)繁,所得菌液用第2次PCR的巢式引物對NestedPCRPrimer1和2R進(jìn)行PCR擴(kuò)增與驗(yàn)證,檢測插入片段的長度,產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測后的結(jié)果見圖3,可以看出大部分插入片段分布在0.25～0.75kb,插入的片段多為單....

圖1總RNA和磁珠純化后的mRNA電泳圖

RNA的電泳檢測結(jié)果見圖1-a,28S和18S亮度比約為1.5∶1～2.0∶1,并可看到模糊的5S條帶,表明提取的RNA質(zhì)量完整,未發(fā)生降解。經(jīng)測定,處理組和對照組總RNA的OD260/OD280分別為1.97和1.93,質(zhì)量濃度為2530μg/mL和2316μg/mL,....

本文編號(hào)：3929185