藍(lán)舌病是由藍(lán)舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)引起的一種非接觸性傳染疾病,通過庫蠓屬的媒介昆蟲在家養(yǎng)或者野生的反芻類動物之間進行傳播。受BTV感染的綿羊通常表現(xiàn)出發(fā)熱、粘膜水腫、潰瘍等臨床癥狀。BTV病毒為二十面體對稱的RNA病毒,有27種不同血清型。BTV由7種結(jié)構(gòu)蛋白(VP1～VP7)和5種非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1,NS2,NS3/NS3a,NS4,NS5)組成。L3基因所編碼的VP3蛋白,相對來說是高度保守的結(jié)構(gòu)蛋白,含有群特異性抗原決定簇,是病毒顆粒的主要核心蛋白。本研究通過原核表達(dá)系統(tǒng)正確表達(dá)藍(lán)舌病I型病毒VP3蛋白并完成純化,以此來研究該蛋白刺激機體產(chǎn)生保護作用和特異性抗體的情況。構(gòu)建了p ET-32a-VP3、p ET-28a-VP3、p ET-28a-Nus A-VP3這3個重組載體,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3);將p ET-28a-VP3轉(zhuǎn)化BL21(DE3)(Tf16);用L-阿拉伯糖及IPTG誘導(dǎo)表達(dá),以選取最優(yōu)表達(dá)方案。最終選用BL21(DE3)(p ET-28a-VP3-Tf16)為最優(yōu)表達(dá)菌,20℃,0.3 mmol/L的IPTG及3.5...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1BTV結(jié)構(gòu)蛋白分布圖

1文獻(xiàn)綜述5形成BTV顆粒的外層球狀基序[55]，VP5相對于VP2而言是保守的外衣殼蛋白，可作為次要的血清型特異性蛋白，還有助于將成熟的病毒顆粒從內(nèi)體區(qū)室釋放到宿主細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。核衣殼（稱為“核心”）具有兩個同心層：外層由VP7組成，最內(nèi)一層由VP3組成，這兩種蛋白在所有的B....

圖2.1標(biāo)簽蛋白NusA載體的構(gòu)建Fig.2.1ConstructionofNusAvector

2VP3蛋白的表達(dá)與純化17計標(biāo)簽蛋白NusA的引物（序列如表2.5所示），并由上海生工生物工程有限公司合成，下劃線部分為NdeⅠ和BamHⅠ酶切位點，斜體部分為保護性堿基，括號內(nèi)為凝血酶切割位點。NusA標(biāo)簽蛋白重組載體構(gòu)建的原理如圖2.1所示，將NusA標(biāo)簽重組到pET-28....

圖2.1BTV-1VP3蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測

2VP3蛋白的表達(dá)與純化232.2.2構(gòu)建VP3原核表達(dá)載體2.2.2.1目的基因的優(yōu)化及引物的合成根據(jù)BTV-1血清型VP3蛋白在NCBIGenBank公布的序列（GenBankaccessionNo.MG255581.1），用DNAStar預(yù)測VP3蛋白的二級結(jié)構(gòu)，如圖2.1....

圖2.2原核表達(dá)載體的構(gòu)建示意圖

2VP3蛋白的表達(dá)與純化24圖2.2原核表達(dá)載體的構(gòu)建示意圖Fig.2.2Constructionofrecombinantvector.2.2.2.2目的基因VP3的PCR擴增及回收（1）擴增VP3目的基因：VP3質(zhì)粒為模板，PCR體系如表2.11所示。表2.11目的基因PCR....

本文編號：3916660