ETHYLENE INSENSITIVE3-LIKE (EIL)基因家族是乙烯信號通道重要的正調(diào)控因子,在乙烯信號傳遞過程中啟動抗病相關(guān)基因表達參與植物免疫應(yīng)答提高植物的抗性。為了研究EIL基因編碼蛋白與下游靶基因特異性結(jié)合傳遞乙烯信號,是否參與木薯抗逆境脅迫的調(diào)控,本研究從木薯中克隆一個EIL同源基因,命名為MeEIL。分析MeEIL啟動子所包含的各種功能元件,結(jié)果顯示該啟動子中含有G-box、W box和MYC等元件。對MeEIL基因的ORF分析結(jié)果表明該基因編碼含621個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。使用同源重組的方法將MeEIL的CDS序列連接到蛋白表達載體pET32a上。SDS-PAGE檢測表明在28℃和16℃都可成功誘導(dǎo)蛋白表達,且28℃誘導(dǎo)效果更佳,通過大量誘導(dǎo)蛋白表達并用His標(biāo)簽純化試劑盒純化,Western blot分析驗證MeEIL蛋白被成功的誘導(dǎo)出來。

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圖2MeEIL基因的氨基酸序列

圖1MeEIL基因啟動子順式作用元件的分布1.3MeEIL克隆及表達載體pET32a-MeEIL構(gòu)建

圖4不同誘導(dǎo)溫度下,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測pET32a-MeEIL重組蛋白的表達量

在誘導(dǎo)蛋白過程中每間隔1h測量一次OD600值，實驗組和對照組每個都要設(shè)置3個重復(fù)，最后求出平均值并算出標(biāo)準(zhǔn)差。觀察實驗組pET32a-MeEIL重組載體和對照組pET32a空載體的大腸桿菌的生長情況，結(jié)果表示，在16℃和28℃誘導(dǎo)蛋白表達的全過程中，含有pET32a-MeEIL....

圖3MeEIL克隆及表達載體pET32a-MeEIL構(gòu)建

圖4不同誘導(dǎo)溫度下,SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測pET32a-MeEIL重組蛋白的表達量圖5不同誘導(dǎo)溫度下大腸桿菌的生長

圖5不同誘導(dǎo)溫度下大腸桿菌的生長

圖3MeEIL克隆及表達載體pET32a-MeEIL構(gòu)建1.6MeEIL蛋白表達純化及Westernblot分析

本文編號：3911092