七鰓鰻屬脊椎動物亞門(Chordata),圓口綱(Cyclostomata),七鰓鰻科(Petromyzoniformes),是無頜脊椎動物的代表,處于無脊椎動物與脊椎動物之間,有著獨特的進(jìn)化地位。因可變淋巴受體(variable lymphocyte receptor,VLR)介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng),受到免疫學(xué)家的廣泛關(guān)注。本研究利用生物信息學(xué)手段分析日本七鰓鰻(Lampetra japonica)VLRB開放閱讀框c DNA(Lja-VLRB),分析結(jié)果顯示VLRB開放閱讀框長822bp,編碼274個氨基酸,分為6個結(jié)構(gòu)域,分別是SP、LRRNT、LRR1、LRRV1、LRRV2、LRRCP、LRRNT。對核酸和氨基酸序列各結(jié)構(gòu)域保守性進(jìn)行計算,結(jié)果顯示LRRNT、LRR1和LRRCT結(jié)構(gòu)域保守性最高,為75%、76%、78%。經(jīng)抗原表位軟件預(yù)測結(jié)果顯示LRRNT、LRR1和LRRCT都有抗原結(jié)合表位。由于LRRCT端以糖基磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidyl-inositol,GPI)結(jié)合旳形式錨定在細(xì)胞膜上不利于抗原結(jié)合,最終選定LRRNT和LRR1結(jié)構(gòu)域序列...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.3VLRB的ORF區(qū)抗原表位預(yù)測

遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文盡管LRRCT結(jié)構(gòu)域保守性很高，且具有抗原表位，但C末端含有一個蘇氨酸和脯氨酸富集的莖(Stalk)區(qū)和一段疏水尾(Hydrophobictail)，通過GPI修飾,將疏水尾切掉然后錨定到膜表面，不利于抗原識別與結(jié)合，相反通過游離端的N端抗原序列用作抗原設(shè)....

圖3.1Lja-VLRB酶切位點的預(yù)測

遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章七鰓鰻VLRB的N端抗原序列分子克壟原核重組表達(dá)與蛋白質(zhì)純化本章節(jié)通過Primer5.0設(shè)計Lja-VLRB分子N端抗原序列引物，成功擴增出Lja-VLRB分子N端抗原序列的目的片段，構(gòu)建Lja-VLRB-PMD19-T表達(dá)載體，提質(zhì)粒并測序成功。成....

圖3.2提取白細(xì)胞方法

遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文圖3.2提取白細(xì)胞方法Fig.3.2Leukocyteextractionmethod（2）總RNA提取方法如下：1）2ml離心管中加入0.1g左右白細(xì)胞，再加入1mlRNAisoplus吹打裂解細(xì)胞。2）室溫下靜置10min后，加入200μl氯仿，上下劇....

圖3.3瓊脂糖凝膠DNA回收方法

遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文圖3.3瓊脂糖凝膠DNA回收方法Fig.3.3TheprotocolforagarosegelDNAextraction2）2μlPCR產(chǎn)物加1μl6×loadingbuffer充分混勻進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。（7）Lja-VLRB分子N端抗原序列目的片段....

本文編號：3911163