目的構建鼠突觸囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表達質粒,并瞬時轉染至人胚腎細胞(HEK293T)中,對其表達進行鑒定。方法以APP/PS1雙轉基因小鼠海馬組織的cDNA為模板,擴增得到長2239bp的SV2A基因編碼序列,將此序列插入到真核表達載體p3×Flag-CMV-10多克隆位點區(qū)域中,得到真核表達質粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,轉化后挑取單克隆菌落經(jīng)雙酶切鑒定后送公司測序,將構建成功的重組質粒轉染至HEK293T細胞中,利用蛋白質印跡法(Western blot)檢測SV2A基因的表達情況。結果成功構建p3×Flag-CMV-10-SV2A重組質粒,并在轉染至HEK293T細胞后,驗證了相應蛋白表達。結論利用分子克隆技術成功構建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表達質粒并在HEK293T細胞中正確表達,為后續(xù)實驗奠定了基礎。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 獲得c DNA
        1.2.2 獲得目的基因
        1.2.3 重組質粒的構建
        1.2.4 重組質粒的鑒定
        1.2.5 重組質粒的表達
        1.2.6 蛋白質印跡法 (Westernblot) 鑒定
2 結果
    2.1 SV2A全序列經(jīng)PCR擴增后電泳鑒定
    2.2 重組質粒p3×Flag-CMV-10-SV2A的酶切鑒定及測序
    2.3 Westernblot分析SV2A蛋白在HEK293T細胞的表達
3 討論
4 結論



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