目的構(gòu)建鼠突觸囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表達(dá)質(zhì)粒,并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至人胚腎細(xì)胞(HEK293T)中,對(duì)其表達(dá)進(jìn)行鑒定。方法以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠海馬組織的cDNA為模板,擴(kuò)增得到長(zhǎng)2239bp的SV2A基因編碼序列,將此序列插入到真核表達(dá)載體p3×Flag-CMV-10多克隆位點(diǎn)區(qū)域中,得到真核表達(dá)質(zhì)粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,轉(zhuǎn)化后挑取單克隆菌落經(jīng)雙酶切鑒定后送公司測(cè)序,將構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞中,利用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)SV2A基因的表達(dá)情況。結(jié)果成功構(gòu)建p3×Flag-CMV-10-SV2A重組質(zhì)粒,并在轉(zhuǎn)染至HEK293T細(xì)胞后,驗(yàn)證了相應(yīng)蛋白表達(dá)。結(jié)論利用分子克隆技術(shù)成功構(gòu)建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表達(dá)質(zhì)粒并在HEK293T細(xì)胞中正確表達(dá),為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 獲得c DNA
        1.2.2 獲得目的基因
        1.2.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.4 重組質(zhì)粒的鑒定
        1.2.5 重組質(zhì)粒的表達(dá)
        1.2.6 蛋白質(zhì)印跡法 (Westernblot) 鑒定
2 結(jié)果
    2.1 SV2A全序列經(jīng)PCR擴(kuò)增后電泳鑒定
    2.2 重組質(zhì)粒p3×Flag-CMV-10-SV2A的酶切鑒定及測(cè)序
    2.3 Westernblot分析SV2A蛋白在HEK293T細(xì)胞的表達(dá)
3 討論
4 結(jié)論



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